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什么是乙酰胺利用率测试？
乙酰胺利用试验是鉴定好氧生物的许多生化试验之一。
- 该试验基于通过脱酰胺的生物体利用乙酰胺。脱染过程在酰亚胺酶的存在下发生。
- 进行乙酰胺利用试验，以区分发酵组和氧化组生物体。
- 这已被广泛用于革兰氏阴性、非发酵类细菌的分化或鉴定铜绿假单胞菌这取决于它们利用乙酰胺的能力。
- 用乙酰胺作为唯一碳源的培养基来观察生长在该培养基上的生物对乙酰胺的利用情况。生长后培养基颜色的变化就可以得出测试的结果。
- 与乙酰胺利用试验类似的试验是柠檬酸盐利用试验，该生物体是根据其利用柠檬酸盐作为碳的唯一来源的能力来识别的。这是用来鉴定属于enterobacteriaceae.家庭。
乙酰胺利用试验的目的
- 根据它们利用乙酰胺作为唯一碳源的能力来区分细菌。
- 识别铜绿假单胞菌来自其他非葡萄糖发酵，革兰氏阴性棒。
乙酰胺利用试验原理
- 乙酰胺琼脂是用来确定生物体利用乙酰胺作为碳的唯一来源的脱酰胺的能力。
- 培养基由乙酰胺组成，作为唯一的碳源，以及用作氮源的无机铵盐。
- 生物体在乙酰胺琼脂上的生长表明乙酰胺利用试验呈阳性。
- 在通过细菌的乙酰胺的代谢期间，酰基酰胺酶的酶促作用导致铵盐分解为氨。因此释放的氨增加了培养基的碱度。
- 培养基pH的变化使培养基中溴百里酚蓝指示剂由绿色变为蓝色，为阳性检测。在没有氨释放的情况下，培养基的颜色保持不变，说明结果为阴性。
- 在某些情况下，乙酰胺同化可能导致黄色，这可能被误认为是阳性结果。
- 然而，通过脱氨基的乙酰胺消化仅限于少量生物体。因此，常用于差异化的该测试铜绿假单胞菌来自其他非葡萄糖发酵，革兰氏阴性棒。
乙酰胺使用试验用培养基和试剂
媒体使用
乙酰胺琼脂的组成如下所列：
| S.N. | 成分 | 克/升 |
| 1. | 氯化钠 | 5．0 |
| 2. | 硫酸镁 | 0.2 |
| 3. | 磷酸铵,单碱的 | 1.0 |
| 4. | 磷酸钾，二元 | 1.0 |
| 5. | 乙酰胺 | １０．０ |
| 6. | 琼脂 | 15．0 |
| 7. | 菠萝蛋白蓝色 | 0．08 |
| 25°C时的最终pH值:6.8±0.2 | ||
| 将2°C储存至8°C。 | ||
乙酰胺琼脂也可在市场上买到，可能有不同的组成。
| S.N. | 成分 | 克/升 |
| 1. | 乙酰胺 | 3.0 |
| 2. | 葡萄糖 | 0.2 |
| 3. | 酵母抽提物 | 0.5 |
| 4. | 磷酸二氢钾 | 1.0 |
| 5. | 苯酚红色 | 0.03 |
| 6. | 细菌琼脂 | 15．0 |
| 7. | 氯化钠 | 5．0 |
| 25°C时的最终pH值:6.8±0.2 | ||
使用的供应或设备
- 无菌接种环或棍子。
- 培养箱在35°C。
乙酰胺使用试验程序
媒体准备
- 在烧杯中，将24.7克脱水粉末或实验室制备的介质加入到1000毫升的蒸馏水中。
- 然后将悬浮液加热至沸腾，使介质完全溶解。
- 溶解的介质然后被分配到管道中，并在15磅压力(121°C)的高压釜中灭菌15分钟。
- 一旦自动灭菌过程完成，将管取出并在倾斜位置冷却至约40-45℃的温度。应保持该位置以获得1.5-2.0cm深度的烟头。
利用率测试
- 孤立的殖民地采用18-24小时的培养物，含有无菌接种针。
- 乙酰胺琼脂管通过将倾斜的表面切割而接种。应使用环路或接种棒来回倾斜，倾斜。
- 应松开试管的盖子，以确保有足够的曝气。
- 然后将试管在35-37°C的有氧条件下培养7天。
- 试管应每天检查4天，再次在7天内再次丢弃结果为负。
乙酰酰胺利用率测试的结果解释
图:乙酰胺使用测试结果。图片来源:贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。
- 积极的测试是由沿斜面从绿色到深蓝色的生长和变化来表示的。
- 负面测试代表没有生长，没有颜色变化，与斜面保持绿色。
控制细菌
作为对乙酰胺利用试验质量控制的一种形式，可将两种不同的生物作为阳性和阴性对照。
| 控制 | 孵化 | 结果 |
| 铜绿假单胞菌 | 有氧孵育24-48小时，33-37°C。 | 乙酰胺阳性（生长;蓝色） |
| 大肠杆菌 | 有氧孵育24-48小时，33-37°C。 | 乙酰胺阴性（没有生长;绿色） |
用于乙酰酰胺利用率测试的用途
- 乙酰胺利用试验用于测试生物体利用乙酰胺作为唯一碳源的能力。
- 它也被用来定性测试革兰氏阴性菌分化为发酵和氧化菌群。
- 乙酰胺琼脂也用作分离的选择性培养基铜绿假单胞菌．
- 该培养基使用了Simmon柠檬酸琼的修饰，以确定乙酰胺在没有蛋白胨或其他蛋白质来源的情况下用作碳源的能力。
乙酰胺使用试验的局限性
- 没有伴随的颜色变化的斜率上的生长可能表明阳性测试。但是，如果琼脂没有进一步孵育，则应用较少的接种物重复测试。
- 否定测试不会排除识别铜绿假单胞菌．应进行其他测试以确认铜绿假单胞菌．
- 只有38%的非绿青素产生株铜绿假单胞菌在该测试中产生阳性结果;因此，应考虑进一步的生物化学测试以识别。
- 当测试需要有氧环境时，不应刺伤倾斜。
- 由于培养培养物的培养基，接种物不应从肉汤培养中取出。
- 应轻接种，以防止从前培养基中携带的物质。
参考资料和来源
- 需氧细菌鉴定的生化试验。(2016)．临床微生物程序手册，3.17.1.1-3.17.48.3。DOI:10.1128/9781555818814. ch3.17.1
- Oberhofer, T. R. & Rowen, J. W.(1974)。乙酰胺琼脂用于非发酵细菌的分化。应用微生物学，28（4），720-721。
- Aetamide琼脂。赛默费雪科学公司
- 贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。