表的内容
蒽酮测试定义
Anthrone测验是一组测验碳水化合物这为定量碳水化合物提供了一种快速而方便的方法，这些碳水化合物要么是游离的，要么是绑定的脂质或蛋白质．
安索恩测试的目标
- 检测在给定溶液中碳水化合物的存在
- 定量:定量溶液中游离和结合碳水化合物的浓度
安索恩测验原理
如果碳水化合物以游离碳水化合物的形式存在，如多聚糖或单糖，或结合在糖蛋白或糖脂中，蒽酮试剂中的浓酸首先将其水解为组分单糖。同样，浓缩酸随后催化单糖脱水形成糠醛(从戊糖)或羟基糠醛(从己糖)。所形成的糠醛或羟基糠醛与蒽酮试剂中的两分子萘酚缩合形成蓝绿色络合物。然后，通过在分光光度计或红色滤光色度计中测量620 nm波长的吸光度来定量该络合物。
图片来源:Rajan Katoch．
反应
1.多糖水解成单糖
多糖→单糖
2.单糖脱水制糠醛
单糖→糠醛
3.糠醛与萘酚的反应
糠醛+蒽酮试剂(萘酚)→蓝绿络合物
需求
1.所需的材料
设备:
- 紫外分光光度计
- 旋涡混合器
- 地幔加热器/水浴。
化学物质/试剂:
- 蒽酮试剂
- 葡萄糖
- 其他需要的碳水化合物
- 样本
玻璃器皿和其他设备:
- 采购产品试管，试管支架，移液器，烧杯，冰试管帽，纸巾，洗瓶。
2.试剂
- 蒽酮试剂:2克蒽酮溶解在1升浓缩氢中2所以4．新配制的试剂应用于检测
- 葡萄糖股票的解决方案:每mL蒸馏水200µg葡萄糖原液从储存的溶液中制备。注:如有需要，可使用相同浓度的其他碳水化合物作为样品。
安王氏试验程序
- 从供应的原液(200µg /ml)中抽出不同体积(50µl, 100µl，等等)的葡萄糖溶液到一系列的试管中，用蒸馏水将体积填充到1ml。
- 取一根标记为空白的管子，里面装有1ml的蒸馏水，其余的管子标记为2到9，用于绘制标准曲线。10-15管用于未知样品。
- 每管加入5毫升蒽酮试剂，旋动搅拌均匀。
- 冷却管。
- 盖上盖子，90°C孵育17分钟或沸水浴10分钟。
- 将管子冷却到室温，在空白上测量溶液在620纳米处的光密度。
- 准备一个吸光度与葡萄糖浓度的标准曲线。
- 在y轴上绘制A620的标准曲线，在x轴上绘制葡萄糖浓度的标准曲线，以确定未知样品中的葡萄糖含量。
Anthrone试验结果与解释
- 蓝绿色复合物的存在表明溶液中存在碳水化合物。
- 从图中我们可以确定未知样品的浓度。
安王氏检验的应用
- 蒽酮试验用于血清、牛奶等各种样品中碳水化合物及其变化的检测和定量。
安索恩检验的局限性
- 在d -葡萄糖苯磺氮酮和d -葡萄糖苯磺苯三醇等碳水化合物样品中，蒽酮试验给出了阴性结果，但在脱水步骤中不形成糠醛或羟基糠醛。
引用和来源
- Am.(1950)碳水化合物安王氏检验的局限性。化学。Soc》72。8.https://doi.org/10.1021/ja01164a521．
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