表的内容
双人的测试定义
BIAL的测试是进行化学试验，以检测戊类和戊烷的存在（戊糖的衍生物）。进行该测试的衍生被称为Bial的核心，以检测溶液中RNA的存在。
双人试验的目标
- 检测存在碳水化合物。
- 将戊类和戊烷与己酸盐等碳水化合物的其他衍生物区分开来。
比亚尔测验原理
本试验是基于戊糖在水解条件下水解为戊糖的原理。此外，戊糖被脱水生成糠醛，糠醛又与orcinol缩合形成蓝绿色的沉淀物。在己糖存在的情况下，形成羟糠醛而不是糠醛，糠醛与orcinol缩合后形成浑浊的棕色沉淀物。沉淀的强度与样品中戊糖的浓度成正比。颜色的强度取决于HCl，氯化铁，orcinol的浓度和沸腾时间。糖的浓度是通过在分光光度计或红色滤色计中测量620nm波长的吸光度来确定的。
反应
图片来源:哈珀的大学。
需求
A.需要材料
设备：
- 紫外分光光度计
- 涡旋混合器
- 地幔加热器/水浴。
化学品/试剂：
- 比阿耳氏试剂
- 核糖糖
- 其他碳水化合物如果需要
- 样本
玻璃车架和其他设备：
- 采购产品试管，试管架，移液器，烧杯，冰试管帽，纸巾，洗涤瓶。
B.试剂
- Bial的试剂：将300mg的orcinol溶于5ml乙醇中。将3.5mL这种混合物加入100ml 0.1％的FECL3.6H2O溶液。由此形成的试剂将储存在暗瓶中并在几小时内使用。
- 核糖股票解决方案：每mL蒸馏水的200μg核糖核糖溶液将由储备溶液制备。注意：如果需要，可以使用相同浓度的其他碳水化合物作为样品。如果使用RNA，则将300μg/ ml的RNA储备溶液加入到TRIS-EDTA缓冲液中。
比氏测验程序
- 将供应的储备溶液（200μg/ mL）（200μg/ ml）移出不同的体积（50μl，100μl等）核糖溶液，进入一系列试管，并用蒸馏水占1mL的体积。
- 将标有一个作为含有1ml只是蒸馏水的空白的管，其余的管标记为2至9，用于构建标准曲线。管10-15用于未知样品。
- 将5ml的双子试剂加入每个管中并通过涡旋混合良好。
- 冷却管。
- 盖上顶部的管子盖上盖子，并在90℃下孵育17分钟或煮沸水浴10分钟。
- 将管子冷却至室温，并在620nm抵抗坯料时测量溶液的光密度。
- 准备核糖浓度的标准吸光度曲线。
- 通过在Y轴上绘制A620的标准曲线和X轴上的核糖浓度来确定未知样品中的核糖量。
Bial测试的结果和解释
图片来源:哈珀的大学。
- 蓝绿色配合物的存在表明样品中存在戊糖。
- 使用该图，可以确定样品中核糖糖的浓度。也可以对RNA检测进行类似的解释。
比氏测验的用法
- 该测试用于检测不同样品中戊糖和戊聚糖的存在。
- 该测试还可用于样品中RNA的定量。
双子考试的局限性
- 在延长加热时，葡萄糖酸盐也可能产生蓝绿色沉淀，这可能导致假阳性结果。
- 不同的糖产生的颜色可能不同，而且浓度可能与更高水平的强度不成比例。
参考资料和来源
- Tiwari A.（2015）。实际生物化学。Lap Lambert学术出版社。
- 3％ - https://www.iitg.ac.in/biotech/mtechlabprotocols/carbohydrate%0eestimation%20by20anthrone.pdf
- 2％ - https://en.wikipedia.org/wiki/biuret_test
- 1％ - https://www.slideshare.net/memijecriuz/qualitative-analysis-of-carbo水合物
- 1％ - https://www.graphpad.com/support/faq/prism-3-calculation-unknown-cencentrations-using-a-standard-curve/
- 1％ - https://msu.edu/course/lbs/145/luckie/lab1.html
- 1%——https://en.wikipedia.org/wiki/Bial%27s_test
- < 1%, https://www.enzolifesciences.com/science-center/technotes/2017/march/what-are-the-differences-between-pcr-rt-pcr-qpcr-and-rt-qpcr?/