胆汁刺轴测试 - 原理，程序，结果，用途，限制

什么是胆汁刺激测试？

胆汁刺激试验是在其水解脓性的能力的基础上，对非群体D viridans组链球菌进行分化以区分肠球菌和群D链球菌进行生化试验。

• 许多生物能够水解脓疱，但其中只有少量胆汁（4％胆汁或40％胆汁）可以这样做。因此，这种性质用于鉴定特定群体的生物体。
• 在选择性差动琼脂上进行胆汁纤维素试验;胆汁刺激琼脂，由胆汁和脓林根组成。
• 琼脂含有不同的胆汁盐，抑制了其他的生长革兰氏阳性生物并允许肠球菌和组D链球菌的选择性分离。
• Esculin是一种糖苷香豆素衍生物（6-β-葡糖苷-7-羟基 - 香豆素），其是荧光化合物，也可以通过荧光的损失观察其水解。
• 胆汁刺激测试已经过多年来修改，并已更快地制作。如今，胆汁纤维素磁盘可用，通常用于D组链球菌和非群体D链球菌之间的快速分化。

胆汁刺激测试的目标

• 根据他们在胆汁存在下水解脓性的能力，鉴定肠球菌和组D链球菌。
• 将肠球菌和D组中的成员与其他viridans或非群体D链球菌区分分化。

胆汁刺激测试原理

• Esculin试验的基础是由于裂解酶的酶促作用的含有胆汁盐存在的脓毒素的水解。
• esculin是由酯键通过氧气连接在一起的葡萄糖蛋白酶组成的葡萄糖。
• 胆汁纤维素测试首先在其在含有4％胆汁的介质中生长的能力选择生物，然后基于它们的水解脓性的能力。
• 脓性的水解导致葡萄糖和称为eSculetin的化合物。
• 埃苏林的降解后，通过脓林素水解产生的骨质素与培养基中的铁离子（来自柠檬酸铁）反应形成酚醛铁复合物，导致深棕色或黑色。
• 或者，埃斯林是荧光化合物，可以通过荧光损失观察其水解。
• 如果将胆汁添加到培养基中，则微生物必须能够在其存在下生长以进行水解脓性。胆汁抑制其他革兰氏阳性生物的生长，使培养基更具选择性。
• 胆汁骨液中40％胆汁（相当于4％oxgall）抑制了大多数菌株的链球菌，除了链球菌Bovis.，但不抑制肠球菌或Listeria.。

微生物测试

• 链中的革兰氏阳性Cocci，其在过氧化氢酶阴性和形态学上被确定为推定S. Bovis。
• 分离α-或γ-溶血性革兰氏阳性COCci作为来自其他吡咯烷基-β-萘酰胺（PYR）阳性生物的肠球菌的分化的一部分
• 非孢子形成，溶血，革兰氏阳性棒，其被过氧化酶阳性和形态学鉴定为推定Listeria.
• 用革兰氏阳性Cocci在链或革兰氏阳性棒中的阳性血液培养，迅速（4小时内）鉴定肠球菌和Listeria.
• 没有胆汁的埃斯林用于鉴定氧化酶阳性有氧革兰氏棒，包括航空罗马斯和黄色着色的非葡萄糖发酵棒

使用的媒体，试剂和用品

媒体使用

• 胆汁刺激琼脂酸盐（III）柠檬酸盐。琼脂板介质，如肠球菌琼脂，具有类似的配方。
• 用铁（III）柠檬酸盐和叠氮化物胆汁纤维素 - 叠氮化物或肉汤。叠氮化物将抑制大多数革兰氏阴性细菌。
• peptose-yeast-esculin肉汤（通常在厌氧气氛中）。
• Feasulin琼脂（在心脏输注基础培养基中0.1％脓疱素），没有胆汁或叠氮，但用铁（III）柠檬酸盐。
• 胆汁刺激琼脂的组成如下：

S.N.	原料	克/升
1。	动物组织的消化物消化	5.0
2。	牛肉提取物	3.0
3.	埃斯林	1.0
4.	胆汁盐	40.0
5。	铁柠檬酸盐	0.5
6。	细菌琼脂	15.0
最终pH在25°C：6.6±0.2
将2°C储存至8°C。

使用的试剂和用品

• 长波（360-nm）紫外线
• 1％铁（III）]如果铁（III）未掺入培养基中，柠檬酸铵

胆汁刺激测试的程序

媒体的制备

• 在烧杯中，将64.5克脱水粉末或实验室制备的培养基加入到1000毫升的去离子或蒸馏水中。
• 然后将培养基加热至沸腾以完全溶解粉末。
• 然后将溶解的介质分布到管中并在15磅压力（121℃）的高压釜中灭菌15分钟。
• 一旦自动灭菌过程完成，将管取出并在倾斜位置冷却至约40-45℃的温度。应保持该位置以获得1.5-2.0cm深度的烟头。

埃斯林水解

• 可以通过管试验或盘试验观察埃斯林水解。磁盘测试是一种快速测试。

管试验

• 孤立的殖民地采用18-24小时的培养物，含有无菌接种针。
• 通过用从培养板拾取的光接种物将倾斜的表面传导倾斜的表面来接种胆汁刺激琼脂管。
• 对于肠球菌和S. Bovis.使用40％胆汁，并用10μl校准的环，在无菌水中制备的0.5麦克兰标准悬浮液，管接种。
• 应放松试管盖，以确保足够的通气。
• 然后将管在35-37℃下孵育24小时（或用于缓慢生长的革兰氏阴性棒和厌氧物），并且观察到颜色变化。
• 对于没有铁（III）柠檬酸盐的尖锐型肉汤，每天观察管以丧失荧光。
• 在没有荧光的情况下，将2或3滴1.0％柠檬酸氢盐加入到壁素管中，并且观察到颜色变化。

磁盘测试

• 用一滴蒸馏水或去离子水润湿侧轴盘。然而，磁盘不应该饱和。
• 使用无菌环，从过夜（18至24-o至24-h）培养物中挑选两种或三个脱离的菌落。
• 在室温下约10分钟后，观察到磁盘在约10分钟后开发深棕色或黑色。

胆汁刺激测试的结果解释

• 通过培养基的黑化表明含有铁氨铁铵的培养基中的正管试验。
• 通过缺乏颜色变化来表示负管测试。培养基将在紫外线（366nm）下发荧光。
• 对于没有柠檬酸铁（III）柠檬酸盐的筛选肉汤，在加入铁（III）]试剂或通过荧光荧光丧失之后，通过肉汤变黑或通过荧光的荧光丧失来证明阳性测试。
• 如果生物体在胆汁存在下，则在胆汁骨林培养基中也发生了阴性试验结果，而不管水解脓性的能力如何。
• 正面磁盘测试由深棕色或黑色的开发表示。
• 负盘测试仍然无色。

下表显示了一些细菌的生长及其胆汁纤维素水解试验：

S.N.	生物	生长	胆汁纤维素水解
1。	肠球菌粪便器	好的	阳性反应;黑色的黑色
2。	大肠杆菌	好的	负反应
3.	肠球菌粪便	luxur	阳性反应;在生长周围的媒体变黑。
4.	yersinia eNteCoolitica.	豪华	阳性反应;黑色的媒介。

用胆汁脓林测试的用途

• 胆汁刺激测试是作为分离肠球菌和D组链球菌的生物化学测试。
• 它也可用于将这些生物分化为viridans链球菌和其他革兰氏阳性微生物。
• 胆汁刺激琼脂是一种选择性差异培养基，用于生物体，如肠球菌，Listeria，和yersinia eNteCoolitica.。

胆汁刺激测试的局限性

• 如果使用较大的接种物或胆汁浓度小于40％，则viridans组链球菌除外S.Bovis.可能对胆汁刺激琼脂进行阳性反应。
• 没有胆汁的esculin测试不能用来分开S. Bovis.（先前称为DA组D链球菌）来自其他viridans组链球菌。
• 几种生物可能会产生H.₂在代谢期间可能与熨斗反应并产生黑色复合物，这会干扰苏林素水解试验的结果，并且可能产生假阳性结果。
• 一些微生物，如大肠杆菌具有β-葡糖苷酶，只有在延长孵育后，才会在该试验中产生阳性结果。然而，如果试验用于检测其他生物中的β-葡糖苷酶，则不应使用长时间孵育。

参考资料和来源

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