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什么是胆汁溶解度测试?
胆汁溶解度试验是一种用于鉴别和确认胆汁溶解度的生化试验肺炎链球菌肺炎料来自其他α-溶血性链球菌。
- 胆汁溶解度试验已被用作分化的基本测试S.肺炎因为它可以区分这两个物种S.肺炎和链球菌假期症,这是一个具有挑战性的任务。
- 该试验基于在某些条件下在某些胆汁盐存在下细菌细胞的裂解。Lyse被认为是积极的生物,而那些不被认为是负面的。
- 测试的确切工作机制仍然没有清楚地理解,但已经假设通过诱导自固溶性酶来引起裂解。
- 胆汁溶解度试验通常被认为是一种准确的鉴别方法S.肺炎来自其他脑菌组链球菌,包括S.伪气肿。
- 然而,该方法的测试结果难以解释,特别是因为它基于主观人体评估。
胆汁溶解度测试的目标
- 识别和区分S.肺炎来自其他α-溶血性链球菌。
- 检测有机体在胆汁存在下进行裂解的能力。
胆汁溶解度试验原理
- 胆汁溶解度试验用于识别和区分S.肺炎从溶血性链球菌SPP。
- 可以使用载玻片或管中的细胞悬浮液或通过直接加入菌落中的试剂来进行测试。
- 胆汁溶解度试验在亚氧胆酸钠(胆汁盐)在特定的时间和温度条件下施加到菌落时肺炎球菌细胞的裂解,但其他链球菌不会粘合。
- 肺炎球菌有一种胞内自溶酶,一种酰胺酶,当在人工培养基上培养时,它使有机体经历快速自溶。
- 胆汁盐改变介质的表面张力并引起细胞膜重排。
- 测试的确切工作机制尚不清楚;然而,已经假设胆汁盐通过激活自固溶性酶促进肺炎球菌细胞的裂解。
微生物检测
- 任何链状的溶血性、过氧化氢酶阴性、革兰氏阳性球菌,具有典型的中央凹陷(中央扁平)或粘液样菌落形态,提示S.肺炎。
- 从阳性血液培养的刺血针形对的任何革兰氏阳性COCCI。
使用的介质,试剂和用品
试剂
- 胆汁盐
- 10%的胆盐溶液可以购买或配制。在100ml蒸馏水中加入10g去氧胆酸钠即可制备胆汁盐。
- 然后应少量分配溶液以最小化污染。溶液的保质期通常为270天。
- 储存应在15到30°C。在低温下储存试剂可能会导致试剂的增稠。
- 0.85%NaCl(灭菌)
- 肉汤培养基(例如Bhi)
补给品
- 循环
- 试管或载玻片
- 移液器
胆汁溶解度试验的程序
胆汁溶解度试验可通过试管方法或直接板法或直接滑动血液培养方法进行。
试管方法
- 将约0.5ml无菌盐水或合适的肉汤分配到小试管中。
- 在盐水中制备生物体的重悬浮液(相当于No.1 McFarland标准)。然后用手或在涡旋上摇动悬浮液以形成均匀的悬浮液。
- 悬架分为两管,一管标记为“测试”,另一管标记为“控制”。
- 将两到五滴胆汁试剂分配到标记为“测试”和“控制”的管中。两根管都轻轻混合。
- 然后将管在35℃下孵育3小时,检查每小时用于清除,或者可以通过革兰染料或亚甲基蓝湿盖,以在15分钟的间隔中裂解细胞裂解的每根管。
直板方法
- 将一滴胆汁试剂放在怀疑的18至24小时菌落附近。
- 然后通过倾斜板在几个代表性菌落中轻轻轧制下降。菌落不应与胆汁试剂脱落。
笔记:胆液试剂滴头不可接触琼脂表面。
- 板保持右侧并在35℃温育15-30分钟,或直至下降蒸发。该板也可以放置在热块上作为替代培养箱的替代品。
- 观察到菌落的平坦化。应确保正确观察,以确保殖民地不仅仅是漂浮。
直接滑动血液培养试验
- 将一滴血液培养肉汤加入玻璃载玻片上的1滴胆汁试剂中,使其干燥。
- 作为对照,将一滴血培养液加到一滴水中,然后晾干。
- 所得悬浮液是克染色并检查COCC1。
质量控制
作为胆汁溶解度试验的质量控制的形式,可以将两种不同的生物体作为阳性和阴性对照。
控制 | 孵化 | 结果 |
肺炎链球菌肺炎料 | 在33-37°C有氧孵育24-48小时。 | 生长积极;在加入胆汁试剂的约30分钟后溶解菌落。 |
链球菌变形 | 在33-37°C有氧孵育24-48小时。 | 生长积极;在加入胆汁试剂的约30分钟后,菌落保持完整。 |
胆汁溶解度试验的结果解释
试管方法
- 在试管方法中证明了胆汁溶解度作为浊度的清除或损失,与“控制”管相比,在3小时内。在显微镜观察时,也可以通过细胞的裂解来表明。
直接滑动血液培养方法
- 如果涂片中的所有COCC1完全裂解,并且控制涂片显示完整的细菌,则生物体是胆汁溶于含量的。
直板方法
- 胆汁溶解度被证明在30分钟内作为殖民地的崩解或平坦化,留下一个α-溶血殖民地所在的地方。
- 当菌落完整性在30分钟内没有变化时,为阴性结果。
报告结果
- 如果斑点或管检测证明了α-溶血性来自过氧化氢酶阴性,刺血针形,革兰氏阳性Coccus的胆汁溶解度,可明确地报告肺炎链球菌肺炎料。
- 如果测试没有表现出胆汁溶解度,有机体可能是viridans组链球菌,但含有百分之一的耐胆体可能仍然是S.肺炎;从典型的肺炎球菌菌落建议进一步测试。
胆汁溶解度试验的用途
- 胆汁溶解度试验用于确定生物体在胆汁存在下进行裂解的能力。
- 本试验可用于鉴别和鉴定S.肺炎来自其他α-溶血性链球菌。
- 本试验是鉴别胆溶性和胆不溶性生物的定性试验。
胆汁溶解度测试的局限性
- 一些S.肺炎有机体可能在胆汁存在下没有粘合,可能是由于毒力因子或胶囊的损失。如果裂解不存在,则孤立可能仍然存在S.肺炎。因此,类似于殖民地S.肺炎不应使用另一种方法进一步鉴定不易溶的易溶性,例如Optochin易感性或DNA探针和基质辅助激光解吸电离飞行时间光谱法(MALDI-TOF)。
- 胆汁溶解度试验只应用于区分S.肺炎来自其他α-溶血性链球菌。
- 为了获得最大的特异性,试管试验阳性和斑点试验阴性菌株应通过视颏盘试验或DNA探针或MALDI-TOF来确认。
- 正常自然分析S.肺炎可以通过高浓度的胆汁抑制抑制。蒸发可能导致试剂变得更浓缩,从而影响测试。
- 胆汁溶解度试验与旧培养物不均匀。
- 使用盐水或无缓冲肉汤进行胆汁溶解度管试验时,必须在添加试剂之前将pH调节至中性,以避免假阴性反应。
- 使用板法进行测试时,必须注意不要移位被测试的菌落,这导致了假阳性结果。如果难以解释直接板,则应使用管或滑动方法重复测试。
- 在寒冷的温度下储存试剂可以使其变稠。试剂瓶应在37℃培养箱中加热,以在使用前液化试剂。
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