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血琼脂是什么?
血液琼脂是一种富含培养物的富含培养基,其通常通过补充血液制备血液琼脂的基础培养基。
- 血液琼脂作为基础培养基,可以用作作为一般生长培养基。基础媒体可以是哥伦比亚agar.或者胰蛋白酶agar..
- 血液琼脂是一种优异的介质,用于培养需要特定的营养素,并且在普通媒体上不完全生长营养琼脂.
- 将5%的去纤维化哺乳动物血液(人、羊或马)加入高压灭菌的基础培养基中,制成血琼脂培养基。
- 它是一种富集的培养基,可支持尖锐的细菌的生长,并抑制一些细菌的生长奈瑟氏菌属,嗜血杆子.
- 对于这些细菌的生长,血液中的抑制剂必须通过加热的血琼脂停用。加热的血液琼脂成为支持的巧克力琼脂奈梅里亚和嗜血杆子.
- 血液琼脂的一个基本用途是观察由生长细菌引起的溶血,然后可以用于鉴定生物体。
- 血琼脂主要用于培养能够产生引起血液溶血的细胞外酶的致病菌。
血琼脂的组成
与大多数其他营养培养基一样,血糖血糖菌具有一种或多种蛋白质来源,盐和牛肉提取物用于维生素和矿物质。除了这些组分之外,还将5%脱纤维哺乳动物血液加入培养基中。血液琼脂碱由各种供应商商业出售,如果必要的成分可用,也可以在实验室中制备。血液琼脂碱的确切组成如下:
S.N. | 成分 | 克/升 |
1. | 蛋白胨 | 10.0 |
2. | 胰蛋白示 | 10.0 |
3. | 氯化钠 | 5.0 |
4. | 琼那 | 15.0 |
最终pH在25°C:7.3±0.2 |
- 在碱基培养基中,在高压灭菌后并在倒入平板之前加入5%无菌哺乳动物血液。
血糖原理
- 血琼脂是一种富含营养的培养基,通过补充血液或作为一般培养基不含血液来支持挑剔的生物体的生长。
- 通过提供这些挑剔的生物所需的额外生长因子,添加到碱基的血液为培养基提供了更多的营养。
- 血液也有助于可视化不同细菌的溶血反应。然而,溶血反应取决于所使用的动物血液的类型。
- 羊血主要用于A组链球菌,其效果最好,但不能支持A组链球菌的生长嗜血杆菌haemolyticus.这是因为绵羊血缺乏吡啶核苷酸。
- 生长和溶血H. haemolyticus.最好用马血,溶血模式甚至可能模仿链球菌Pyogenes羊血。
- 除了培养基中使用的血液外,蛋白胨和胰蛋白酶提供碳,氮,氨基酸,维生素和细菌所需的矿物质。蛋白质和胰糖是水溶性的,这使得生物体更容易吸收营养物质。
- 在培养基中加入氯化钠是为了维持培养基的渗透平衡,防止培养基在生长过程中pH值的变化。
- 蒸馏水提供了一种溶解营养物质的介质,使细菌更容易吸收它们。
- 琼脂是一种固化剂,为生物体的生长提供了稳定的表面,可以观察菌落的形态和枚举生物体。
- 在某些情况下,将酚酞磷酸盐添加到培养基中以检测产生磷酸盐的葡萄球菌,并添加盐和琼脂以评估表面污染。
血糖和溶血
溶血是由于某些细菌种类产生的细胞外酶引起的血液中红细胞的裂解。由这些细菌产生的细胞外酶称为溶血蛋白,其从菌落径向扩散,导致红色血细胞的完全或部分裂解。在血液琼脂上观察到四种不同类型的溶血,每个血糖均可以通过在生长菌落周围存在的溶血区域鉴定。
1.α溶血
- 溶血是由于红细胞的部分溶解而在菌落周围出现灰绿色或棕色的变色。
- 在α溶血,H2O2细菌产生的血红蛋白使存在于培养基红细胞中的血红蛋白转化为高铁血红蛋白。
- 一些α-溶血物种是人类正常菌群的一部分,但有些物种喜欢肺炎链球菌肺炎导致肺炎和其他这种严重的感染。
2.β血液溶解
- β溶血由在血液琼脂上生长时由菌落下方和周围的清晰区域定义。
- 由于培养基中存在的红细胞的完全裂解,透明区域出现,导致血红蛋白的变性形成无色产物。
- β-溶血细菌包括A群链球菌样S. pyogenes和B组链球菌S. ArAlactiae.这两种疾病都与人类的严重感染有关。
伽马溶血
- 溶血也称为非溶血,因为红细胞不溶解。
- 结果,在菌落下或周围观察着着色或没有溶血区的变化。
- 物种如Neisseria脑膜炎是非溶血或γ-溶血。
4.α素或宽带α溶血
- α'溶血由邻近于细菌菌落完整红细胞的小区域所定义,与周围完整红细胞的红细胞区完全裂解的区域。
- 由于菌落周围的清晰区域的外观,这可能会与β-溶血混淆。
血琼脂的制备
- 约40克配制的培养基加入到1000ml蒸馏水或去离子水中。
- 将悬浮液加热至沸腾,使介质完全溶解。
- 然后在15磅压力和121°C下蒸压15分钟进行灭菌。
- 然后将介质从高压釜中取出,冷却到40-45°C左右。
- 为此,有无菌性地添加5%V / V无菌脱血液血液并混合良好。
- 然后在无菌条件下将培养基倒入无菌培养皿中。
- 一旦介质凝固,板就可以在较低的热环境下放置在热空气烘箱中几分钟以在使用前除去板上存在的任何水分。
血糖储存
- 粉状介质应储存在10 ~ 30℃的密闭容器中,配制的介质应储存在20 ~ 30℃。
- 打开后,在干燥后,应适当地储存产品,紧紧地覆盖瓶子以防止块状形成,因为培养基本质上吸湿,因此相对迅速地吸收水分。
- 装介质的容器应储存在干燥通风的地方,避免极端温度和火源。
- 该产品应在标签上的到期日之前使用。
结果血琼脂解释
图像来源:https://www.microbiologyinpictures.com/index.php.
基础介质显得浅琥珀色,可能看起来略微渗透凝胶。加入5%后,V / V无菌过频血液;然而,樱桃红彩色不透明凝胶形成在培养皿上。下表展示了在血液琼脂培养基上的菌落形态的重要医疗细菌的生长:
S.N. |
生物 |
增长 |
殖民地形态学 |
溶血 |
1. | Neisseria脑膜炎 | 豪华 | 灰色和无色素的菌落出现圆形,光滑,潮湿,闪闪发光,有清晰的边缘。 | 非溶血或γ-溶解。 |
2. | 沙门氏菌伤寒 | 豪华 | 光滑无色菌落,光滑,湿润,平坦,直径范围为2-4毫米。 | 非溶血或γ-溶解。 |
3. | 金黄色葡萄球菌 | luxur | 金黄黄色圆形,凸,平滑菌落的直径范围为2-4毫米;具有溶血区的不透明菌落。 | β-溶血。 |
4. | 葡萄球菌表皮 | luxur | 圆形,菌落直径1-4毫米;灰色到白色,低凸高度;潮湿的,闪闪发光的殖民地。 | 非溶血或γ-溶解。 |
5. | 链球菌Pyogenes | luxur | 白色灰色菌落,直径为> 0.5毫米;菌落被β-溶血区包围,其通常是菌落直径大的两到四倍。 | β-溶血。 |
6。 | 肺炎链球菌肺炎 | luxur | 小,灰色,湿润(有时胶印在包封的毒性菌株中),具有α-溶血性的特征区的菌落(绿色);由于自溶,通常产生比典型的火山口外观产生凹陷的溶血区。 | α-溶解。 |
7。 | 铜绿假单胞菌 |
豪华 | 大小的大小2-5mm的大殖民地;灰色菌落,灰色至白色,具有带波状边缘的带有β-溶血区域。 | β-溶血。 |
用血琼脂的用途
- 血液琼脂的主要目的是为了培养和分离挑剔的生物奈梅里亚和链球菌。
- 它还可以用于分化细菌的溶血类型(α-,β-或γ-溶解)它们在琼脂上产生。
- 通过在培养基中加入磷酸酚酞,血琼脂可用于产磷葡萄球菌的检测。
- 血液琼脂通常用于制备沙门氏菌伤寒抗原。
- 血琼脂基础被认为是分析食品样品的标准方法。
血糖的局限性
- 的增长嗜血杆菌血栓溶解由于存在不同的抑制剂,在血液琼脂上被抑制,这可以仅通过在添加血液后加热培养基来消失。
- 溶血的模式可能因所用血液的类型而不同。
- 向基础培养基添加兔子或马血全支持的生长h . hemolyticus,但增长就像链球菌物种,因此应确认。
参考资料和来源
- 血琼脂基础(灌注琼脂)。M073。HiMedia实验室。
- Spellerberg B,Brandt C. Streptocccus pyogenes(组A Streptocci)2016年2月10日的实验室诊断链球菌Pyogenes:临床表现的基础生物学[互联网]。俄克拉荷马城(OK):俄克拉荷马大学健康科学中心;2016-。可从:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK343617/
- 朱丽丽,邹凤才,严玉林,王启辉,石永强,瞿伟杰,“中国文化的特征”金黄色葡萄球菌从慢性乳腺炎被隔绝的小殖民地变异在云南省,中国的奶牛场“,科学世界杂志, 2016年第1期,文章编号9157605,8页,2016年。https://doi.org/10.1155/2016/9157605
- https://www.cdc.gov/meningititity/lab-manual/chpt08-daracterization-streppneumo.pdf.
- http://www.bacteriainphotos.com/pseudomonas-aeruginosa-hemolysis.html.
- https://www.cdc.gov/meningitis/lab-manual/chpt07-id-characterization-nm.html
好笔记
非常好的帖子,真的很感激你的努力保持稳定
无乳链球菌不是a组链球菌。
......它是B组被盗。
气体和GBS都表现出B溶血
你好,实际上我们的意思是说群体肌肉霉菌(Perogens)和S. ArAlactiae.分开。我们会把它说得更清楚些,以免发生混乱。非常感谢你的建议。
什么指标用于血糖?
帮助表示感谢
您需要如何添加到基于琼脂的介质以确定微生物是否产生溶血化合物?
做得好
那个笔记是可理解的。谢谢提醒我..
PLZ给我Makonky Agar Pripration
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