脑脂提取方案

• “脑脂提取物”是指从动物的脑组织中提取的脂质混合物。
• 已经发现，这种脑脂质提取物含有长链多不饱和脂肪酸（PUFA）的混合物，其具有四种或更多个双键，并且非常类似于人母乳中发现的PUFA的混合物。
• PUFA的混合物通常包括花生素酸（ARA），二十二碳六烯酸（DHA）和DOCOSAT四烯酸（DTA）。
• 这些PUFA是人类婴儿正常发展所必需的重要结构脂质。

脑脂提取原理

大脑中的脂质通常是用氯仿和甲醇的混合物提取的，提取方法与福尔赫和同事最初描述的方法不同。在大多数程序中，组织或匀浆用19卷2:1 (v/v)的氯仿-甲醇混合物处理。形成一个单一的液相，留下大分子物质的残余，主要是蛋白质，少量的DNA, RNA和多糖。随后向chcl3 -甲醇提取物中加入少量水，导致分离成富氯仿和甲醇水相;低氯仿相包含脂类，而低分子量代谢物和极性脂类，如神经节苷类，则在上相。如果较低的相被蒸发到干燥，并在脂质溶剂(如氯仿)中取回，蛋白脂蛋白仍然未溶解，此时可以被除去。神经节苷脂可以通过再分配到极性溶剂中从水相中提取。酸性磷脂如聚磷酸肌苷在中性pH下难以提取，因此有必要酸化最初的氯仿-甲醇混合物来回收它们。以硅酸为固定相，通过薄层色谱(TLC)、离子交换色谱(离子交换色谱)或高效液相色谱(HPLC)从脂类提取物中分离脂类。

脑脂提取所需材料

大脑组织样本

氯仿，甲醇，0.9% NaCl溶液

振动器，漏斗，滤纸，离心机，涡旋

提取脑脂质的方法

最流行的提取方法是福尔赫。

1. 取100克新鲜脑组织剁碎匀浆。用氯仿/甲醇(2/1)均质组织，使其最终体积为组织样本体积的20倍(20毫升溶剂混合物中1克)。
2. 分散后，在室温下在轨道振荡器中在15-20分钟内搅拌整个混合物。
3. 匀浆是过滤的（用折叠滤纸的漏斗）或离心以回收液相。
4. 用0.2体积（4mL，20mL）水或更好的0.9％NaCl溶液洗涤溶剂。
5. 在涡旋后几秒钟后，将混合物以低速（2000rpm）离心以分离两相。
6. 通过虹吸化去除上阶段，并将其保留为分析神经节苷脂或小有机极性分子。如有必要，用甲醇/水（1/1）冲洗界面一或两次，而不混合整个制剂。
7. 在上部相离心和虹吸后，含有脂质的下部氯仿相在旋转蒸发器真空下蒸发，如果体积在2-3毫升以下，则在氮气流下蒸发。

脑脂提取的预期结果

属于不同脂质类的脑脂质的粗提物。

参考

1. 福精，j;LEES，M .;斯隆斯坦利，G.H.（1957年5月1日）。“一种简单的方法，用于分离和纯化动物组织的总脂质”。中国生物化学杂志。226：497-509。
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/nbk28239/
3. http://www.cyberlipid.org/extract/extr0005.htm.
4. http://lipidlibrary.aocs.org/history/content.cfm?itemnumber=40362
5. https://link.springer.com/referenceWorkentry/10.1007%2F978-94-007-7864-1_89-1
6. https://patents.google.com/patent/wo1992022291a1
7. http://www.jbc.org/content/226/1/497.full.pdf