丁酸盐磁盘测试-原理，过程，结果，用途，局限性

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什么是丁酸磁盘测试?

丁酸片试验是一种用于检测的快速鉴定试验莫拉克斯氏菌属复活根据它们利用溴氯吲哚丁酸酯或4-甲基伞形酰基丁酸酯的能力。

  • 莫拉克斯氏菌属(布兰汉氏球菌属)复活的现在被认为是引起中耳炎、鼻窦炎、结膜炎、支气管炎和肺炎的主要病原体。
  • 此外，大量的复活的菌株产生β-内酰胺酶，因此对青霉素和氨苄西林具有耐药性。
  • 传统的测试可能需要24到48小时完成，而替代的快速、易于执行的识别方法，如丁酸磁盘测试是可取的。
  • 在实验室中，丁酸酯酶的存在是通过水解底物如溴氯吲哚丁酸酯或4-甲基伞形酰基丁酸酯来证明的。
  • 测试可以通过圆盘测试或管式测试进行。这两种测试都是快速识别测试，但圆盘测试更可行，因为它不需要像试管测试一样准备试剂。
  • 在圆盘试验中，底物的水解可以通过水解产物产生的荧光来观察。

丁酸酯圆盘试验的目的

  • 检测和识别M。复活的从临床样本作为推定的鉴定方法。
  • 检测生物体通过生产丁酸酯酶水解丁酸底物的能力。

丁酸盐圆盘试验原理

  • 丁酸试验是一种检测丁酸酯酶的快速定性试验，进一步提供了一种推测的鉴定工具M。复活的．
  • 当试验用的是连同生物的特征形态上血琼脂盘子,典型的革兰氏染色剂，积极的氧化酶试验，丁酸试验是有用的确定鉴定莫拉克斯氏菌属复活．
  • 溴氯吲哚丁酸酯和4-甲基伞形酰基丁酸酯都可以作为底物。
  • 丁酸酯酶水解溴氯吲哚基底物，释放吲哚基，在氧气存在下形成靛蓝。靛蓝是一种显色化合物，从蓝色到蓝紫色。
  • 4-甲基伞形酰基底物水解产生紫外光下可见的荧光化合物。
  • 因此，水解可以通过产物的颜色变化或荧光检测来检测。

微生物检测

  • 革兰氏阴性，氧化酶阳性双球菌生长在血琼脂平板上的白色菌落，当用环或丝提起时仍保持在一起。

使用的试剂和用品

试剂

  • 浸渍溴氯吲哚丁酸酯和4-甲基伞形酰基的圆盘。

供应

  • 无菌木质涂抹棒或细菌循环
  • 蒸馏水
  • 有盖培养皿、玻片或试管
  • 长波(360-nm)紫外光

丁酸盐盘试验程序

  1. 将圆盘从小瓶中取出，放在一个干净的玻片或培养皿上。
  2. 滴一滴蒸馏水或去离子水到圆盘上使其湿润。
  3. 用无菌的木质涂抹棒或一个24 - 72小时培养的环收集一个重的、可见的接种物，并放置在培养皿上。
  4. 接种盘在室温(15至30°C)下培养5分钟。
  5. 可能需要稍长时间的潜伏期以产生假阳性结果。

质量控制

  • 如果磁盘不呈白色且无可见颜色，则应丢弃。
  • 作为质量控制的一种形式，以下生物体可用于阳性和阴性结果。
  1. 复活的ATCC -丁酸正。
  2. 淋病奈瑟氏菌或奈瑟氏菌属lactamica-丁酸-。

丁酸片试验结果与解释

丁酸盐盘试验-原理、步骤和结果解释

图片来源:贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。

  • 阳性测试结果在5分钟内呈蓝色到蓝紫色(溴氯吲哚基底物)或荧光(4-甲基伞形酰基底物)，表明溴氯吲哚和4-甲基伞形酰基分别被丁酸酯酶水解。
  • 阴性检验是指没有颜色变化。

报告结果

  • 结果报告为莫拉克斯氏菌属复活如果氧化酶阳性，革兰氏阴性双球菌符合以下标准;
  1. 在BAP上作为菌落生长，当取样和
  2. 丁酸正
  • 丁酸盐阴性的菌落M。复活的可以用上述的dna酶生产标准进行检测。dnase阳性菌落被报道为莫拉克斯氏菌属复活．

丁酸盐磁盘测试的使用

  • 丁酸酯圆盘试验是一种快速推定鉴定试验，用于检测M。复活的．
  • 丁酸试验也用于分析生物体通过丁酸酯酶的酶促作用水解丁酸底物的能力。
  • 该测试也被用作生化测试，以区分淋病奈瑟氏菌(负面)莫拉克斯氏菌属复活(阳性)，两者均为氧化酶阳性，革兰氏阴性双球菌。

丁酸盐磁盘测试的局限性

  • 培养时间不应超过5分钟，以避免假阳性反应。
  • 其他的一些品种莫拉克斯氏菌属物种，以及Eikenella和不动杆菌，可能会产生正的或弱正的反应。
  • 该微生物必须是具有典型形态的氧化酶阳性、革兰氏阴性双球菌，才能被准确鉴定为M。复活的．
  • 其他不相关的微生物，如葡萄球菌和假单胞菌也可能带来积极的结果。
  • 假阴性试验可能是由于接种量太小造成的。如果怀疑是生物体，但试验是阴性的，用大剂量接种或dna酶生产试验重复。

引用和来源

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