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Calcofluor白色染色
- 钙氟白是一种化学荧光蓝色染料，非专门用于结合阿米巴囊肿的β -多糖聚合物。
- 它的功能是能够结合1-3 β和1-4 β多糖在甲壳素和纤维素，是存在的细胞壁在真菌，植物和藻类上。
- 由于在检查细胞的速度，染色被氢氧化钾(KOH)湿mount代替，这是更快的。
目标
- 染色染色真菌和寄生成分
- 在荧光显微镜下观察真菌和寄生元素的存在
白钙染色原理
- 使用钙氟白色染色技术作为一种比较染色，专门用于鉴定甲真菌病真菌感染。
- 在荧光显微镜下，在紫外光下发出明亮白光的几丁质结构。
- 钙氟白染色作为一种非特异性荧光染料，结合几丁质和纤维素细胞壁，已被描述为最快速的检测真菌和酵母等卡氏肺孢子虫，微孢子虫，棘阿米巴，奈格里亚和巴拉木西亚物种。
- 当与氢氧化钾混合用于真菌元素时，钙氟白色染色剂可以很好地显现。
- 使用的复染剂是伊文思染色剂，它形成一个黑暗的背景，使组织和细胞使用蓝光激发而不是紫外线发出荧光。
- 其他元素发出红橙色荧光，而真菌和寄生元素发出明亮的苹果绿色荧光。
试剂
- 钙氟白色着色剂
- 氢氧化钾
钙白染色程序
- 小心地将标本放在干净的玻片上
- 加一滴石灰石白色染色剂产生强烈的荧光
- 加入一滴10%的氢氧化钾
- 用盖玻片盖住试样，让其吸收污渍1分钟
- 用干纸巾轻轻压在污渍上，去除多余的染料
- 在x100-x400倍的紫外线下观察污渍。
结果
真菌、肺孢子虫囊肿和寄生虫在紫外荧光显微镜下呈现明亮的苹果绿，紫色和蓝色的光。
图a:酵母钙荧光染色。酵母的细胞壁呈鲜亮的蓝色。
b:鹰蕨横断面显示CFW中明亮的绿色和明亮的蓝色荧光。来源:钙氟白
解释
钙氟白色水溶液在300 ~ 412 nm范围内吸收荧光，并有吸收峰
在347nm处。最大激发和荧光出现在紫外光下，尽管紫光或蓝紫光激发也会产生良好的结果。组织显示黄绿色背景荧光，真菌和寄生虫显示更强烈和更可见。
钙氟白色染色的应用
- 白钙染色可用于临床真菌学和寄生虫学:
- 通过识别它们的囊肿来证明阿米巴寄生虫的存在。
- 用较高含量的几丁质对酵母细胞的芽痕进行染色，使芽痕的定量显示细胞的年龄。
- CFW还用于增强巴氏涂片巴氏染色中叶芝的反应。
- 用于染色肺孢子菌、小孢子虫目隐孢子虫，还有一些钙荧光阳性的寄生囊肿
- 检测念珠菌在荧光显微镜下使用CFW对癌变和癌前病变进行检测
- 钙氟还用作白色服装的染料，形成黑色照明外观。
- CFW是一种水溶性无色的织物增亮染料。因此，它被添加到洗涤剂中作为布的增白剂
优势
- 它是一种快速、简便的细胞病理学和组织病理学诊断方法
- 它不需要任何特殊的试剂，使染色有效。
局限性
- 它是昂贵的
- 在某些情况下可能不准确
钙荧光染色录像营养轮虫
工具书类
- https://www.sciencedirect.com/topics/agricultural-and-biological-sciences/calcofluor-white
- https://en.wikipedia.org/wiki/Calcofluor-white
- https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/mucicarmine-stain
- http://biology.fullerton.edu/facilities/em/Library/calcofluor.pdf
- https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK288/
- https://www.researchgate.net/publication/277230586_Calcofluor_White_A_Review_of_its_Uses_and_Applications_in_Clinical_Mycology_and_Parasitology
- https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-dentistry/calcofluor-white