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巧克力琼脂与血液琼脂基本相同，不同之处在于在制备期间，在加入熔融琼脂碱时裂解红细胞。结果，细胞裂解释放细胞内营养素，例如血红蛋白，血红蛋白（“X”因子）和辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD或“V”因子）进入琼脂，其被缩小的细菌利用。当准备好时，红细胞裂解给中等巧克力棕色着色，琼脂获得其名称。需要这种富含生长的富集培养基的最常见的细菌病原体包括淋球菌和嗜血杆子物种。
巧克力琼脂的组成
| 原料 | GMS / L. |
| 酪蛋白/动物组织消化 | 15.0g. |
| 玉米淀粉 | 1.0g |
| 氯化钠 | 5.0g |
| 磷酸二钾 | 4.0g |
| 磷酸金属磷酸钾 | 1.0g |
| 血红蛋白解决方案 | 2％ |
| 高酶富集 | 10.0ml. |
| 琼那 | 10.0G. |
最终pH 7.2±0.2（25°C）
巧克力琼脂的制备
血红蛋白溶液的制备
将血红蛋白加入蒸馏水并将体积带到500毫升。在21℃下在15℃下彻底和高压釜彻底混合15分钟。在45°C -50°C下冷却。
制备媒介
除血红蛋白溶液除以蒸馏水外，添加组件并将体积带到500ml。混合彻底。轻轻加热直到沸腾。在21℃下在15°C的15磅压力下高压釜15分钟。在45°C -50°C下冷却。加入500ml无菌血红蛋白溶液并彻底混合。倒入无菌培养皿或分配到无菌管中。
巧克力琼脂的原则
巧克力琼脂基碱随附补充剂，通过污染生物体而无过度生育，促进了严重的生物体的优异增长。酪蛋白和动物组织消化，为生物体提供含氮营养，氨基酸和其他对生物生长必不可少的元素。作为奈梅里亚物种对有毒物质非常敏感，如脂肪酸，因此玉米淀粉的添加有助于中和可能的毒性代谢物，而磷酸钾有助于在生长期间保持均匀的pH。氯化钠保持渗透平衡，从而保持细胞的完整性。巧克力琼脂也被认为是血液琼脂平板的变体，含有通过缓慢加热至80℃而被裂解的红细胞。热灭活酶，否则可能降解NAD。添加的补充剂提供了累积生物所需的必要X因子（来自血红蛋白）和V因子（来自生长补充）。
还可以对特定生物体的生长进行一些修饰。Thayer-Martin Media是巧克力琼脂，其补充了万古霉素，黑牛霉素和菌氨酸，以抑制正常的植物群，包括选择性孤立的非遗传性植物N.淋病术和N. Meningitidis.。补充有Bacitracin的巧克力琼脂是一种选择性培养基，用于改善主要分离H.流感从含有细菌和/或真菌混合植物的标本。补充有GC碱和生长补充的巧克力琼脂是另一种改进，支持孤立挑剔的生物所需的特殊增长要求（HEMIN和NAD），例如H.流感E在35-37℃下在5％CO 2气氛中孵育时。
结果解释巧克力琼脂
- 淋球菌生产小，灰色到白色，粘液菌落，平滑一致性和定义的边距。
- Neisseria Meningitidis.产生更大的蓝色灰色，粘液，圆形，凸，光滑，湿润，闪闪发光的殖民地，具有明确的边缘。
- 嗜血杆菌流感产生小，无色，潮湿的殖民地，具有特征精液。
巧克力琼脂的用途
- 它用于分离和培养尖胎微生物，特别是嗜血杆子和奈梅里亚物种。
- 它用于隔离淋球菌从慢性和急性病例的淋病菌感染。
巧克力琼脂的局限性
- 建议应对纯文化的孤立的菌落进行额外的生化和/或血清学检测以完成鉴定。
- 巧克力琼脂是一种富集的培养基，因此非致病生物可能过度促进致病细菌。如果隔离N.淋病术期望是一种选择性培养基，例如Thayer Martin琼脂，改性应该与该非选择性公式平行使用。
- 沉淀的血红蛋白可能出现在介质上或介质中的暗点，并且不会影响介质的性能。
- 存在或缺席N.淋病术在标本中不排除其他致病生物的可能存在。
参考
- Dalynn生物学
- 东北实验室服务
- 希德米亚
- 哈迪诊断
- Ronald M.Atlas和James W. Snyder。临床和公共卫生微生物学的媒体手册。CRC压力机。2014由Taylor＆Francis Group，LLC。