柠檬酸盐利用率测试原理，程序，结果，用途

什么是柠檬酸盐利用率测试？

柠檬酸盐利用率测试是IMVIC测试的一部分（吲哚那甲基红色那vogues-proskauer.和柠檬酸盐试验基于它们使用柠檬酸盐作为唯一能量来源的能力来区分生物体。

柠檬酸盐试验与其他IMVIC试验一起进行，以区分肠杆菌植被的革兰氏阴性杆菌。
这是一个重要的测试，允许肠杆菌痤疮家族成员的物种级别鉴定。
除了几种物种，沙门氏菌那Edwardsiella.那citrobacter那Klebsiella.那肠杆菌那Serratia.，和普罗维登西亚通常给出阳性反应，和埃斯克里希亚洲那志贺丽那莫加尔格拉，和yersinia.给出负反应。蛋白质是柠檬酸盐变量。
该试验也称为Simmon的柠檬酸盐试验，因为它利用Simmon的柠檬酸琼脂含有柠檬酸盐作为主要能量来源。
培养基还含有磷酸铵（NH_4.H₂宝_4.）作为氮的唯一来源。
在该试验中产生阳性结果的生物应该能够在酶柠檬酶存在下发酵柠檬酸盐。

柠檬酸盐利用率测试原理

柠檬酸琼脂用于测试生物体利用柠檬酸盐作为能量来源的能力。
琼脂培养基含有柠檬酸盐作为唯一的碳源和无机铵盐作为氮的唯一来源。
生物体的生长指示柠檬酸盐的利用，因为它是克雷斯循环中的中间代谢物。酶拟柠檬酸酯将柠檬酸盐分解成草酸和乙酸盐，其中脱氧酸酯进一步分解以形成丙酮酸和二氧化碳。
二氧化碳的释放诱导铵盐的代谢，导致形成氨或碳酸钠，这两者都会增加培养基的碱度。
pH的偏移将培养基中的溴硫醇蓝指示器从绿色到蓝色以上的pH 7.6

柠檬酸盐→草氧乙酸→丙酮酸+ CO₂

来自柠檬酸钠+ CO的过量钠₂+ H.₂o→na₂CO._3.

培养基上的生物体的生长随后是颜色的变化;结果，柠檬酸盐代谢给出阳性柠檬酸盐试验。

微生物测试

的成员enterobacteriaceae.，作为物种级别识别的一部分

使用的媒体，试剂和用品

媒体使用

西蒙的柠檬酸琼脂用作测试生物体利用柠檬酸盐作为唯一能量来源的能力的培养基。
Simmon的柠檬酸琼脂由不同的供应商以脱水粉末形式商业出售。但是，如果必要的成分可用，也可以在实验室中制备。
以下是Simmon柠檬酸盐琼脂的组成：

S.N.	原料	克/升
1。	磷酸二氢铵	1.0
2。	硫酸镁	0.2
3。	磷酸二钾	1.0
4.	柠檬酸钠	2.0
5。	氯化钠	5.0
6。	Bromo Thymol Blue.	0.08
7。	细菌琼脂	15.00
最终pH在25°C：6.8±0.2

用品使用

接种环或针
培养箱35-37°C

柠檬酸盐利用率测试

1.制备媒体

在烧杯中，将24.28克脱水粉末或实验室制备的介质加入1000毫升纯蒸馏水或去离子水中。
然后加热溶液以使其沸腾以完全溶解培养基。
然后将溶解的介质分配到管中，并在15磅压力（121℃）的高压釜中灭菌15分钟。
一旦自动灭菌过程完成，将管取出并在倾斜位置冷却至约40-45℃的温度。应保持该位置以获得1.5-2.0cm深度的烟头。

2.利用测试

孤立的殖民地采用18-24小时的培养物，含有无菌接种针。
通过将倾斜的表面传导来接种柠檬酸琼脂管。应使用环路或接种棒来回倾斜，倾斜。
应放松试管盖，以确保足够的通气。
然后将管在35-37℃下孵育至多4天。
试管应每天检查4天，然后将结果丢弃为负面。
观察到颜色的变化，如果存在。

质量控制

无菌Simmon的柠檬酸琼脂应该出现，因为森林绿色略微乳白色凝胶倾斜。
应在使用前进行冻结，污染，裂缝，脱水和气泡的证据检查琼脂。在使用前可能出现蓝色的任何管应丢弃。
测试的正面和阴性对照是：

Klebsiella肺炎：柠檬酸盐正面对照
大肠杆菌：柠檬酸盐阴性;负面控制

柠檬酸盐利用率测试的结果解释

数字：柠檬酸盐利用率测试。图像来源：Bailey和斯科特的诊断微生物学。elewsvier。

通过生长来证明阳性测试，沿着倾斜沿着绿色变为强烈的蓝色。
对阴性试验没有生长和没有颜色变化，并且倾斜的颜色仍然是绿色的。

下表展示了柠檬酸盐利用重要医疗细菌的结果：

S.N.	生物	生长	柠檬酸盐试验
1。	大肠杆菌	抑制	消极的;培养基的颜色仍然是绿色的。
2。	肠杆菌空气原味	豪华	阳性反应;从绿色到蓝色的介质颜色的变化。
3。	Salmonella Entnitidis.	豪华	阳性反应;从绿色到蓝色的介质颜色的变化。
4.	Salmonella typhimurium.	豪华	阳性反应;从绿色到蓝色的介质颜色的变化。
5。	Shigella Dysentriae.	抑制	消极的;培养基的颜色仍然是绿色的。

柠檬酸盐利用率测试的用途

柠檬酸盐试验用于确定生物体利用柠檬酸盐作为唯一能量来源的能力。
将柠檬酸盐试验作为IMVIC试验的一部分进行，以区分肠杆菌的成员。
该试验还用于基于柠檬酸盐利用率的粪便大肠杆菌和AEROGES组成员之间的分化。

柠檬酸盐利用率测试的限制

没有随附的颜色变化的斜率上的茂盛增长可能表明正面测试。但是，如果琼脂在进一步孵育时不会变为蓝色，则应用较小的接种物重复测试。
应重复常规结果的测试。
由于测试需要有氧环境，因此不应刺伤倾斜。
由于媒体携带的风险，接种不应从肉汤培养物中完成。
为避免伪阳性反应，应使用轻质淋巴粉，以防止来自先前介质的物质的残留。
单独的该培养基的反应不足以鉴定物种水平，并且应进行进一步的测试以进行确认。

参考资料和来源

西蒙斯柠檬酸琼脂。M099s。Hamedia实验室。
生物化学检验鉴定有氧细菌。（2016）。临床微生物学程序手册，3.17.1.1-3.17.48.3。DOI：10.1128 / 9781555818814.ch3.17.1。
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