凝固酶试验-原理，程序，类型，结果，用途

凝固酶试验的定义

凝固酶测试是用于区分的生物化学测试金黄色葡萄球菌来自其他葡萄球菌种类的物种美国epidermidis和美国saprophyticus基于生产凝固酶酶的能力。

凝固酶测试是将葡萄球菌属的种类与两组分化为两组的重要测试;凝固酶正葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌。
凝固酶酶作为一些生物中的毒力因子，因为它与宿主细胞表面上存在的纤维蛋白原相互作用。
具有凝固酶的生物体通常在自身周围有一个保护屏障，增加了它们的致病性和对免疫系统的抵抗力。
凝固酶有两种类型;游离凝固酶和结合凝固酶，分别用不同的方法检测。
结合的凝结酶称为块状因子，并通过滑动试验快速检测。由于凝块的形成，在试管中检测到自由凝结蛋白酶。

凝结酶测试的目标

检测不同生物产生的游离凝结酶和结合凝血酶。
目的:鉴别凝固酶阳性葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌。
识别和区分年代。葡萄球菌来自其他葡萄球菌。

凝血酶试验原理

凝固酶是一种酶促蛋白质，其是一种热稳定的凝血酶样物质，其将纤维蛋白原转化为纤维蛋白，导致凝血蛋白形成或夹住。在年代。葡萄球菌，发现两种不同形式的凝固酶;游离凝固酶和结合凝固酶。

绑定凝固酶

凝块因子，称为结合凝固酶，可以在玻片试验中迅速检测到，但这种试验需要几个菌落，缺乏敏感性。
金黄色葡萄球菌在它的细胞壁中产生另一种物质，蛋白质A，它与F结合_C人免疫球蛋白G（IgG）的部分，因此用作凝结酶反应因子。
当乳胶或红细胞颗粒被IgG和人纤维蛋白原包裹时，如果凝集因子或蛋白a存在于细菌细胞壁中，葡萄球菌就会凝集。
凝块因子的存在是通过生物直接作用于血浆中的纤维蛋白原，使其在玻片试验中凝结的能力来证明的。
对丛集因子的测试是迅速的，但需要几个菌落，并且还有一个因素可能并不存在年代。葡萄球菌生物。

免费凝固酶

另一种由机体释放的凝固酶是自由凝固酶。
自由凝固酶不同于结合凝固酶，自由凝固酶的凝血机制需要激活血浆凝固酶反应因子(CRF)， CRF是修饰或衍生的凝血酶分子，形成凝固酶-CRF复合物。
加入管中的等离子体最好是作为结合因子的兔等离子体。
在试管中，复合物与纤维蛋白原反应形成纤维蛋白凝块。

微生物测试

革兰氏阳性球菌的群集是过氧化氢酶阳性，作为鉴定的一部分金黄色葡萄球菌。
含有革兰氏阳性COCC1的正血液培养物，用于快速检测年代。金黄色葡萄球菌。

使用的试剂和用品

试剂

用EDTA冷冻等离子体（优选兔血浆）。人血浆通常不用于测试，因为它与人类致病病毒的敏感和潜在感染性较小。
5％Cacl.₂(可选)

补给品

环或无菌棒
玻璃或塑料管
玻璃幻灯片

凝血酶试验程序

凝结酶可以通过两种不同的方法检测;管试验和滑动试验。

滑测试

将约10μl去离子水或生理盐水加入载玻片中。
从一种新鲜培养物中收集来自新鲜培养的几种菌落，并乳化成水中以获得光滑的乳色悬浮液。
将一滴兔或人血浆添加到载玻片中，并立即观察到丛，不超过10秒。

管测试

血浆用生理盐水稀释。（在1.8ml盐水中加入0.2ml等离子体）
然后将5ml稀释的血浆加入试管中。将约5滴测试有机体培养物加入试管中。
将试管混合并在37℃下孵育一小时。
最终观察到凝块形成。如果未观察到凝血，则应以30分钟的间隔检查管，长达6小时。

结果解释凝结酶测试

数字：凝结酶测试。降低,玻片凝血酶检测凝血因子。左侧为正数;右边是负的。较低的B -试管内游离凝血酶试验。左边的导管呈阳性，显示有血块。右边的试管是阴性的。上图:凝血酶试验阴性葡萄球菌表皮(左)和凝血酶试验阳性金黄色葡萄球菌(中心和右侧)。下图像源A和B:贝利和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔和以上图片来源:新汉森(维基百科)．

滑测试

阳性测试是在添加血浆后对细菌细胞凝集的证明。
阴性试验表明缺乏凝集作用。

试管

正面测试符合以下标准之一：

24小时之前完整的凝块形成或任何程度的凝块形成。
加1、2滴5%钙离子后无血栓形成₂在24小时内没有凝块的管。

阴性检测符合下列条件之一:

在25°C下缺乏24小时的凝块形成。
在35℃下24小时后没有凝块，但添加1或2滴5％CaCl后₂在管子上形成了一个血块。

凝固酶阳性生物：金黄色葡萄球菌和其他动物宿主细菌假媒介S.，媒介S.， schleiferi, delphini，海icus, S. lutrae，海icus

凝血酶阴性生物：葡萄球菌椎板虫，S. saprophyticus，S. Warneri，S. Hominis，S. Caprae，等等。

凝固酶试验的应用

凝结酶试验用于测定不同微生物产生的凝结酶。
该测试也可用于区分年代。葡萄球菌来自其他葡萄球菌。
根据凝固酶的产生情况，葡萄球菌种类可分为凝固酶阴性和凝固酶阳性两种。

凝固酶试验的局限性

耐甲氧西林年代。葡萄球菌可缺乏结合凝固酶，导致玻片试验阴性。
S. Impertius.和美国hyicus在管试验中可能是阳性的;这些物种分别仅在狗和猪中发现，但也是传染性的金黄色葡萄球菌当它们感染人类时。
S. lugdunensis.和美国schleiferi产生滑动凝固酶，但如果使用人的血浆而不是兔血浆，反应更有效。
柠檬酸血液不应被用作可能发生假阳性结果。
凝结酶测试不能从生长中进行甘露醇盐琼脂．

参考资料和来源

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