补体固定试验-原理，程序，结果，类型

补充是一些特殊的化学物质或蛋白质成分，它们是我们体液免疫的一部分，有助于建立抗原抗体复合物，吞噬、降解和冲走它们。它们存在于血液中或附着在膜附近。如。C1, C2, C3, C4蛋白等。

补体系统是一些蛋白质的集合，相互作用，启动一系列的反应，以协助防御我们的免疫系统。

什么是补体固定?

定义-补体固定是最重要的方法之一，也是最经典的测定方法之一抗原抗体复合物存在于测试样品中。

在补体固定中，在溶液中形成的抗原-抗体复合物与补体蛋白固定，并进行进一步的过程，因此得名。

注:仅抗原或抗体不能固定补体。固定通常表示补体蛋白在使用中。

它发生在两种情况下，即体内(在人体内)和体外(在实验室试验等人工条件下)。

补体固定试验需求

样品如血清或脑脊液(可能包含或不包含感兴趣的特定抗原或抗体)

已知的互补抗原基于要检测的组件。

补充蛋白质:样本中存在的原生补体是灭活的。从其他生物(如豚鼠)血清中获得的补体在测试过程中添加到样品中。

我ndicator系统:羊红细胞或红细胞表面包被抗体(主要来源于兔血清)。这些红细胞也可称为敏化红细胞。

补体固定试验原则

当抗原和抗体相互作用时，它们形成一种复合物，称为抗原抗体复合物(Ag-Ab)。然后复合物与补体蛋白相互作用并与补体蛋白固定。在固定后，补体降解或分裂成两个片段，即较小和较大的片段。

如。C2被分解成C2a和C2b。较大的片段或活性位点仍然附着在Ag-Ab复合物上，而较小的片段分离并作为信号分子。信号分子向巨噬细胞提供吞噬复合物和破坏抗原的信号。这是一个生物或体内机制．

补体固定试验该指标体系采用Ag-Ab复合物仅能固定补体的原理及其对红细胞溶血的影响。

如果样品中含有所需的抗体或抗原，在添加互补反应物(抗原或抗体，根据所检测的成分)后，样品中会形成Ag-Ab复合体，指示体系将无法与添加的补体发生反应(因为它已经与Ag-Ab复合体固定)，从而导致指示体系没有变化。

指标体系无变化是指红细胞无裂解或无溶血。

积极的测试

样本抗体+抗原(添加)+补体→补体固定Ag-Ab复合物

补体固定Ag-Ab +指标体系→无变化(无溶血)

负面的测试

无抗体样品+抗原(添加)+补体→游离补体

指标体系中抗原(添加)+抗体(红细胞上)→Ag-Ab复合物

Ag-Ab复合物+补体→固定补体系统→溶血

补体固定试验过程

取血清样本。
然后在大约56°C下加热，以去除样品中已经存在的补体蛋白。
然后用洗过的绵羊红细胞吸附血清。它可以防止交叉反应的抗红细胞抗体对测试的干扰。
然后将抗原和补体添加到样本中。
然后将其在37°C的温度下孵育30分钟。它为Ag-Ab络合物的形成提供了条件和时间。
然后加入指标体系，观察样品是否发生溶血而发生变化。

图:补体固定试验程序。图片来源:德州卫生服务部而且Rowa Yousef Alhabbab．

补体固定试验结果解释

如果样本中含有感兴趣的特定抗体或抗原，检测后溶液中没有变化，将被认为是阳性检测。非溶血致敏红细胞将保持原样并在样品中沉淀下来。

如果在测试过程中由于溶血导致样品或溶液的外观有一些变化，将被认为是阴性测试。

补体固定试验应用程序

沃瑟曼试验是检测梅毒的补体固定试验之一。这是一个抗体检测测试。
它还可用于检测由细菌引起的疾病肺炎分枝杆菌百日咳博德特氏菌等。
它可用于检测病毒感染和真菌感染，如组织胞浆菌病，隐球菌病等。

补体固定试验优势

测试后的结果解释更容易。
它可用于检测样品中极少量的抗原或抗体成分．
它可用于检测各种感染。
它有很好的灵敏度。

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补体固定试验限制

这是一种在目前的实践中使用不多的老方法。
与目前使用的许多更简单的快速检测测试相比，它更慢、更复杂。
它很难执行和安排用于它的试剂。
虽然它是一种敏感的试验，但它的灵敏度低于试验，如ELISA．

补体固定试验的类型

间接补体固定试验

当血清不能修复豚鼠补体时使用。这些包括鸟类血清(鹦鹉、鸭)和哺乳动物血清(猫、马)。在这里，测试设置为两份。在步骤1之后，将已知能固定补体的抗原的标准抗血清添加到一组中。如果测试血清中不存在抗体，则抗原将与标准抗血清反应，固定补体。另一方面，如果在测试血清中存在抗体，抗原将在第一步被利用。因此，标准抗血清与抗原之间不会发生反应，因此补体的固定不会引起绵羊红细胞的裂解。因此在这种情况下溶血表明阳性结果。

结合体吸收试验

在这个测试中，使用了非溶血性的马补体。所使用的指示系统是将致敏的绵羊红细胞与牛血清混合。牛血清中含有一种叫做凝集素的β球蛋白，它也会与这种补体结合，引起绵羊红细胞的凝集(粘连)，表明结果为阴性。如果第一步采用Ag-Ab反应利用马补体，则不会发生致敏细胞的凝集。

免疫粘附

当一些细菌(如霍乱弧菌或梅毒螺旋体)在补体和一些颗粒(如红细胞或血小板)的存在下，它们与它们的特异性抗体结合，粘附在红细胞或血小板上。这被称为免疫粘附。免疫粘附促进细菌的吞噬。

固定测试

在这里，抗原与患者的血清在补体存在下孵育。如果存在一种特异性抗体，它就会使抗原失活。如。梅毒钯固定试验，被认为是梅毒血清诊断的金标准。阳性检测显示血清中含有密螺旋体抗体。

细胞溶解的测试

活细菌与其特异性抗体在补体存在下的孵育可导致细菌细胞的裂解。这是基础杀弧菌抗体试验用于测量抗霍乱抗体。

参考文献

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