表的内容
- 免疫电泳指抗原混合物首先被分离成其组成部分的过程电泳然后通过免疫扩散进行测试。
- 琼脂糖凝胶中的电泳抗原混合物允许不同的抗原沿着凝胶载玻片分离，然后抗体在凝胶中的横向扩散发生，导致沉淀形成。
- 对流免疫电泳是免疫电泳的一种改进，抗原和抗体向相反的方向移动，并在它们以最佳比例的浓度相遇的区域形成沉淀。
- 它也被称为逆流或交叉免疫电泳。
- 该技术类似于Ouchterlony方法，唯一的区别是，抗原的移动是由电泳促进的。因此，它也被称为“电压促进双免疫扩散”。
目标
逆流免疫电泳大多是为了下列一个或多个目的而进行的:
- 快速检查任何抗血清是否存在针对特定抗原的抗体和特异性。
- 检测血清中的抗原和/或抗体以诊断某种疾病
原则
逆流免疫电泳依赖于抗原在电场作用下通过琼脂向阳极运动和抗体向阴极运动。实验是在高电内渗流量琼脂糖凝胶载玻片上进行的。一对孔被打出来，其中一个孔充满抗原，另一个孔充满抗体。然后电流通过凝胶。在电场作用下，抗原和抗体的迁移极为便利，在30-60分钟内，沉淀呈沉淀素弧线出现，为阳性反应。
材料
琼脂糖，抗原，抗血清试验，阳性抗血清，检测缓冲液，电泳仪，玻片
过程
- 将10ml的1.0%琼脂糖(0.1 g/ 10ml)放入1X检测缓冲液中，慢慢加热直到琼脂糖完全溶解。
- 玻片的末端标记为+ve和-ve，这样当放置在电泳仪中时，+ve标记面向阳极，负极标记面向阴极。
- 玻璃板或载玻片放置在水平面上。取5ml琼脂糖并铺在玻片上。让它凝固15分钟。
- 使用凝胶打孔机根据模板在凝胶中切割井。两孔之间的距离不要保持超过0.5 cm。
- 将载玻片置于电泳槽中，电泳槽中充满1X电泳缓冲液，直至缓冲液刚好覆盖凝胶表面。
- 向阴极(负电极)方向每孔加入10µl抗原，向阳极(正电极)方向每孔加入10µl阳性对照抗血清和检测抗血清。
- 电源线按照约定连接到电泳电源。
- 应用50v，电泳继续进行约45分钟，完成后对结果进行解释。
结果
- 抗原与抗血清之间的沉淀素线显示阳性反应或特异性抗原抗体反应因为存在针对抗原的抗体。
- 沉淀素线的缺失表明没有反应或没有任何相应的抗体-抗原。
- 沉淀素线的存在表明抗体对抗原的异质性。
应用程序
逆流免疫电泳有许多用途:
- 它是一种快速和高度特异性的方法，用于检测血清、脑脊液和其他体液中的抗原和抗体，用于诊断许多感染性疾病，包括细菌、病毒、真菌和寄生虫。
- 该方法在过去广泛应用于血清甲胎蛋白、包膜抗原等多种抗原的检测隐球菌和脑膜炎球菌在脑脊液。
- 时至今日，乙肝表面抗原(HBsAg)、胎蛋白、包虫病和阿米巴抗原以及脑脊液隐球菌抗原仍被广泛应用于血清。
- 这是一种快速、灵敏的检测痰中肺炎球菌荚膜抗原的方法。
优势
- 快速检测抗原抗体的方法(30分钟)。
- 比电免疫扩散(EID)更敏感，因为它涉及抗原和抗体在凝胶中同时电泳，在相反的方向导致带的形成。
- 比双扩散技术更快、更灵敏。
限制
- 它比基于凝集的测试更昂贵。
- 它被认为降低了灵敏度、速度和简洁性，然后是乳胶凝集试验。
参考文献
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- http://himedialabs.com/TD/HTI007.pdf
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