脱羧酶测试原理，程序，结果，用途

脱羧酶测试定义

脱羧酶试验是对分辨成员进行的生物化学测试enterobacteriaceae.的它们产生的酶脱羧酶能力的基础上。

• 氨基酸的代谢可能在有氧和散热菌细菌以及革兰氏阴性生物中不同。
• 氨基酸的代谢可能是通过脱羧，水解或脱氨基发生，这取决于氨基酸是代谢的和生物体。
• 脱羧的脱羧酶的存在下催化的键的断裂发生结合的羧基的氨基酸的其余部分。
• 脱氨基发生在致脱氨酶的存在下，该酶催化将氨基结合到氨基酸其余部分的粘合剂的破裂。
• 通过催化氨基酸代谢的生物体产生三种不同的脱羧酶酶;鸟氨酸脱羧酶，精氨酸脱羧酶和赖氨酸脱羧酶。
• 这些酶的产生是作为肠杆菌族家族中存在的细菌分化的重要参数。
• 此外，在筛选肠杆菌膜的鉴定中，鸟氨酸脱羧酶试验是至关重要的，特别是用于分离成员Klebsiella-enterobacter-serratia小组和识别物种蛋白质。

脱羧酶测试的目的

• 测试生物体产生脱羧酶的能力。
• 根据其生产脱羧酶酶的能力，将肠杆菌痤疮家族的成员分化。

脱羧酶试验的原理

• 精氨酸，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶介质用于检测生物体对脱羧或水解氨基酸的能力，形成产生碱性pH的胺。
• 基础培养基通常是Moeller的配方，含有肉胨和牛肉提取物，供应含氮营养，以支持细菌生长。
• 培养基含有葡萄糖作为可发酵的碳水化合物和吡哆醛，其是增强脱羧酶活性的酶辅因子。pH指示剂是溴醇紫色和甲酚红色。
• 像精氨酸，赖氨酸和鸟氨酸等氨基酸单独加入基础培养基中以检测酶的酶的产生，即脱羧或水解这些基材。
• 在培养基中发酵葡萄糖之后，产生酸，其降低pH，导致紫色至黄色的颜色变化。
• 如果生物体产生脱羧酶，偶羧化或氨基酸的水解响应于酸pH。
• 脱羧导致碱性终端产物（胺），导致培养基恢复其原始颜色（紫色）。
• 在不发酵葡萄糖，培养基不变黄的生物体的情况下;然而，测试仍然可以进行，但通过包括无氨基酸比较对照。
• 赖氨酸的脱羧产生尸胺，鸟氨酸的脱羧产生Putrescine，并且精氨酸的脱羧导致紫红素，其通过二氢酶水解以形成Putrescine。
• 在另一种反应中，精氨酸二氢酶催化精氨酸转化为瓜氨酸，其进一步转化为鸟氨酸，最终产生腐凝物。
• 脱羧是一种厌氧反应，因此，必须用油或石蜡密封每个管的内容物。

微生物测试

• 肠革兰根负棒和弧菌那Plesiomonas.，和航空罗马斯用于识别物种级别
• 可能Stenotrophomonas.和伯克德利亚（赖氨酸和精氨酸）荧光灯假单胞菌（精氨酸）
• 凝固酶阴性葡萄球菌（鸟氨酸）
• 草绿色链球菌组（精氨酸）
• 各类非葡萄糖发酵，革兰氏阴性杆菌（精氨酸）
• 传播吲哚阴性蛋白质（鸟氨酸）

使用的媒体，试剂和用品

媒体

• 脱羧酶试验介质碱（Moeller用于测试氨基酸脱羧酶活性。也可以使用类似运动 - 吲哚喹啉培养基（MIO）和赖氨酸铁琼脂等培养基。
• 所述脱羧酶介质基体的组合物是下面给出：

S.N.	成分	克/升
1。	动物组织的消化物消化	5.0
2。	酵母抽提物	0.3
3.	葡萄糖	1.0
4.	Bromo Cresol紫色	0.1
5。	克里索尔红色	0.005.
6。	吡哆醛.	0.005.
最终的pH在25℃：6.7±0.2

使用试剂

• 矿物油
• 瓦斯帕尔，液体石蜡或石油果冻，以液体形式保持在56℃

用品使用

• 无菌棒或接种环
• 培养箱中在35℃下

脱羧酶测试的程序

A.媒体的制备

• 在烧杯中，将9.02克脱水粉末或实验室制备的介质加入到1000毫升的纯蒸馏水或去离子水中。
• 然后将溶液加热以使其沸腾以完全溶解培养基。
• 然后将介质分为四个相等的部分。管道在没有添加任何氨基酸的情况下进行管道，并且管被标记为“对照”。
• 剩余的三个部分被分配到三个管中，向其中L-赖氨酸盐酸盐，L-精氨酸盐酸盐和L-鸟氨酸盐酸盐分别加入0.5％的终浓度。
• 约3-4毫升媒体被分配在螺旋盖管中并通过在10磅压力（115℃）进行20分钟高压灭菌消毒。
• 为了避免在介质的表面上假碱化，建议液体石蜡添加到灭菌前约5毫米的高度。

B.脱羧酶测试

用于葡萄糖发酵生物

• 18-24小时脑心脏浸液肉汤培养基一滴加到每个三个脱羧酶肉汤（精氨酸，赖氨酸和鸟氨酸）的。
• 葡萄糖发酵生物不需要控制管。
• 向每个管中加入4mm的无菌矿物油。
• 将试管然后在环境空气中温育4天在35-37℃。
• 然后在24,48,72和96小时的颜色变化观察管子。

葡萄糖 - 纯粹的生物

• 的悬浮液（>麦法兰第5号）在脑心脏浸液肉汤是从过夜培养物制备（18-24小时龄）5％绵羊生长血琼脂。
• 四个脱羧酶肉汤中的每一个接种有四个制备的悬浮液。
• 向每个管中加入4mm的无菌矿物油。
• 将试管然后在环境空气中温育4天在35-37℃。
• 然后在24,48,72和96小时的颜色变化观察管子。

控制生物

控制	控制管的颜色	结果
		精氨酸	赖氨酸	鸟氨酸
Klebsiella肺炎	黄色	-	+	-
肠杆菌肝脏	黄色	+	-	+

结果脱羧酶试验的解释

• 阳性试验是浑浊的紫色，以褪色黄紫色（碱性）。
• 阴性测试是明亮的透明黄色（酸）或没有变化（均匀杆）。
• 控制管必须保持原始颜色或转黄色。控制管中的浊度和碱性或紫色无效。可疑结果与控制管进行了比较。

图：脱羧酶测试（摩尔方法） - 正，阴性和未均匀的管。图像来源：Bailey和斯科特的诊断微生物学。爱思唯尔。

测试生物	结果
	赖氨酸脱羧	精氨酸脱羧	鸟氨酸脱羧
肠杆菌空气原味	阳性反应;改变颜色到紫色	阴性反应;黄色肉汤	阳性反应;改变颜色到紫色
大肠杆菌	变量	变量	变量
Klebsiella肺炎	阳性反应;改变颜色到紫色	阴性反应;黄色肉汤	阴性反应;黄色肉汤
Proteus Ventgaris.	阴性反应;黄色肉汤	阴性反应;黄色肉汤	阴性反应;黄色肉汤
假单胞菌铜绿假单胞菌	阴性反应;黄色肉汤	阳性反应;改变颜色到紫色	阴性反应;黄色肉汤
沙门氏菌伤寒	阳性反应;改变颜色到紫色	延迟阳性反应或负反应	阴性反应;黄色肉汤
Serratia marcescens.	阳性反应;改变颜色到紫色	阴性反应;黄色肉汤	阳性反应;改变颜色到紫色
Shigella Flexneri.	阴性反应;黄色肉汤	延迟的正或负反应	阴性反应;黄色肉汤
霍乱霍乱	阴性反应;黄色肉汤	阳性反应;改变颜色到紫色	阳性反应;改变颜色到紫色

用脱羧酶测试的用途

• 脱羧酶试验用于区分肠杆菌族家族的成员，具有密切相关的生理特性。
• 精氨酸脱羧酶是在鉴定有用肠球菌到物种水平;肠球菌粪便器和肠球菌粪便精氨酸是积极的，但，鸟肠球菌精氨酸是阴性的。
• 赖氨酸脱羧酶用于区分沙门氏菌（+）和志贺丽（ - ）。

脱羧酶测试的局限性

• 必须将矿物油或类似的气体释放屏障施加到每个接种肉汤介质的表面上。表面上的油减少了由于氧化而在培养基中发生的碱性偏移的可能性。
• 结果解释不应该被前18至24小时的潜伏期制成。此前解释可能会导致错误的结果。葡萄糖发酵前10至12小时的温育内发生。从发酵的酸性环境是必要的生产脱羧酶。
• 葡萄糖 - 纯度微生物可能显示脱羧酶活性较弱，从而导致转化pH指示系统所需的胺产生不充分。然而，一些非发酵罐将产生足够的胺，与未致命的管相比，导致更深的紫色。
• 管中的灰色颜色可以指示指示剂的减少，而不是生产碱性终端产品。为了帮助阅读反应，应添加另外的溴酚紫色。
• 如果不同颜色的两个层出现，该管应轻轻地解释反应之前振摇。
• 葡萄糖 - 精氨酸阳性的细菌必须是赖氨酸和鸟氨酸阴性。

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