直接显微计数

• 对食物、水、牛奶和某些情况下的空气等物质进行分析的研究需要对这些物质中的微生物进行定量枚举。
• 许多方法已经被设计来实现这一点，包括直接显微镜计数，使用电子细胞计数器，如库尔特计数器，估计细胞质量或细胞成分的化学方法，浊度测量增加的细胞质量，以及连续稀释琼脂平板法。

• 直接显微镜计数需要使用一种叫做Petroff-Hausser计数室的特殊玻片，在这个玻片中，对真核细胞悬液的等量进行计数，并用数学方法确定细胞的总数。
• Petroff-Hausser计数室是一个厚的玻璃显微镜载玻片，中心有一个0.02毫米(1/50毫米)深的计数室。
• 该室包含一个蚀刻网格和改进的纽鲍尔裁决(1/400平方毫米)。
• 裁定覆盖9毫米²．边界线(纽鲍尔裁决)是三个组的中心线。
• 中心的平方毫米被划分成16个小正方形的组，每组用三条线隔开，中间的一条是边界。
• 规则表面是0.02毫米以下的覆盖玻璃，这使得体积超过一个平方毫米0.02毫米(立方毫米)。所有的细胞都以这个平方毫米计算。
• 计算单元格数的方法如下:

每mm细胞数=计数细胞数*稀释度* 50000

[使用50000的因子来确定1ml的细胞计数:1ml = 1000 mm3 =(50倍的腔室深度0.02 mm) * 1000。]

直接微观计数的变化已被用于观察和测量生长自然环境中细菌的数量为了检测和证明在沸腾的温泉中有嗜热细菌生长，T.D. Brock将显微镜载玻片浸泡在温泉中，并定期取出进行显微镜观察。沸水中的细菌附着在玻璃上幻灯片并在表面以小菌落的形式生长。

直接显微计数的优点

• 快速，简单，容易的方法，需要最少的设备。
• 当细菌计数时，可以观察到细菌的形态。
• 如果它们被适当地稀释，则可以计算非常致密的悬浮液。

直接显微镜计数的局限性

• 虽然快速，但直接计数有活细胞和死细胞都被计数的缺点。
• 只有高浓度的悬浮液可以计数(>每毫升107个细胞)，但样品可以通过离心或过滤来浓缩以增加灵敏度。
• 它对少于100万个细胞的群体不敏感。
• 小细胞在显微镜下很难看到，并且可能错过了一些细胞。
• 精确是很难达到的
• 当样品未染色时，需要使用相衬显微镜。

参考

1. 卡布奇诺，J.和威尔士，C.(2014)。微生物学:实验室手册，全球版，第1版。培生教育
2. sstry A.S. & Bhat S.K.(2016)。医学微生物学基础。新德里：杰比兄弟医药出版社。
3. http://textbookofbacteriology.net/growth_2.html.
4. http://repository.uobabylon.edu.iq/mirror/resources/paper_2_13669_749.pdf
5. https://courses.lumenlearning.com/boundless-microbiology/chapter/counting-bacteria/
6. http://ecoursesonline.iasri.res.in/mod/resource/view.php?id=101513