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脱氧核糖核酸酶(DNase)测试定义
脱氧核糖核酸酶(DNase)测试是一种生化测试，根据生物产生dna酶的能力来区分它们。
- 脱氧核糖核酸(DNA)是由多个核苷酸单体组成的大分子大小的聚合物，体积较大，不能进入细菌细胞膜。
- 微生物产生脱氧核酸酶酶以将DNA分解成较小的单体，然后可以容易地将其吸入细胞中。
- 核苷酸被用来制造细菌的核酸，同时也是氮、磷和碳的来源。
- 一些微生物甚至可以产生细胞外DNase，其将较大的DNA分解成较小的单体单元，使得它们可以通过在细胞膜上存在的输送蛋白质在细胞中。
- DNA的降解也被认为是一种毒性因子，因为它导致宿主DNA的降解。
- 因此，产生dna酶的能力可以用来区分不同的病原微生物。
- dna酶检测是推定鉴定的重要检测手段金黄色葡萄球菌并将其与其他葡萄球菌区分开来。
脱氧核酸酶（DNase）的目的
- 确定生物体产生DNase酶的能力。
- 区分和识别S.金黄色葡萄球菌从其他葡萄球菌物种。
脱氧核糖核酸酶原理
- DNA酶是一种能水解DNA并释放游离核苷酸和磷酸盐的酶。
- 细菌产生的脱氧氧核酸酶是细胞外核酸酶，其分解DNA，产生高浓度的寡核苷酸。
- 用于检测这些酶的培养基可以通过使用各种指示剂（甲苯胺蓝或甲基绿）或没有指示器来检测DNA的水解。
- 第一个方法在没有指示符的情况下执行。DNA的水解是通过加入HCl后琼脂的清除来表示的(寡核苷酸溶解在酸中，形成一个清晰的区域，但DNA盐是不溶解的)。
- 当添加甲基绿色指示器时，DNA与甲基绿色结合以产生绿色。
- 当DNA被水解时，复合物被释放出来，释放出来的甲基绿色在pH为7.5时是无色的。
- 加入甲苯胺蓝O (TBO)，与DNA形成复合物，DNA被水解时复合物结构发生变化，呈亮粉色。
- 染料的介质可以抑制一些微生物生长。使用沉重的接种物可以防止这个问题并使测试更快，因为它检测到预先形成的酶。
- 金黄色葡萄球菌具有一种热稳定酶，即热切酶。为了检测这种酶，首先，生物体被加热破坏，然后游离dna酶与培养基反应。
微生物检测
- 暗示的革兰氏菌暗示Stenotrophomonas麦芽酚(阳性)，粘菌素或多粘菌素B耐分离Burkholderia cepacia.(负面)。
- 可能是革兰氏阴性双球菌莫拉克斯氏菌属复活(积极的)。
- 可能是革兰氏阳性球菌S.金黄色葡萄球菌(阳性)，很难从其他密切相关的葡萄球菌中分离出来，并有可疑的凝固酶反应。有些葡萄球菌可能不能在有染料的培养基上生长，所以可以使用没有指示剂的方法。
- 肠杆菌科识别Serratia.(积极的)和分离他们克雷伯氏菌种虫害和肠杆菌属spp。沙雷氏菌属fonticola是唯一的Serratia.dna酶阴性。
- 氧化酶- 积极，吲哚阳性，克消极以便分离航空罗马斯和霍乱弧菌(DNase积极)邻单胞菌属shigelloides（DNase负数）。
使用的介质，试剂和用品
媒体使用
- DNase试验琼脂碱用于测试DNase酶的产生。还可以添加培养基，用甲基绿色或甲苯胺蓝O等指标。
- DNase Test Agar Base的组成如下:
| S.N | 原料 | 克/升 |
| 1。 | Tryptone | 15．0 |
| 2。 | 大豆蛋白胨 | 5.0 |
| 3. | 脱氧核糖核酸（DNA） | 2．0 |
| 4。 | 氯化钠 | 5.0 |
| 5。 | 细菌学的琼脂 | 15．0 |
| 最终pH在25°C: 7.3±0.2 | ||
试剂使用
- 1 n hcl.
用品使用
- 无菌棒，针或接种环
- 巴斯特液体吸管或吸管
- 沸腾热块
- 35和30°C的恒温箱
脱氧核糖核酸酶(DNase)程序
A.媒体的准备
- 在烧杯中，将42克脱水粉末或实验室制备的介质加入1000毫升的纯蒸馏水或去离子水中。
- 用搅拌加热悬浮液，使其沸腾，以便完全溶解介质。
- 然后将溶解的介质在15磅压力（121℃）下致溶于15分钟。
- 一旦自动灭菌过程完成，将烧杯取出并冷却至约40-45℃的温度。
- 然后在无菌条件下将介质倒入无菌培养皿中。
- 如需添加指标，在灭菌前向培养基中添加0.1 g甲苯胺O或甲基绿。
b . DNase测试
没有指标
- 用无菌接种环或接种针将18小时培养的试验生物接种在琼脂平板上。
- 将板在35-37℃温育24小时。
- 将孵育的琼脂平板用1N HCl溶液淹没，倾斜过量的酸。
- 将试剂吸收到平板中的一段时间。
- 在培养皿中观察到菌落周围在5分钟内有一个清晰的区域。
与指标
- 具有指示剂的琼脂平板用测试生物从18小时培养物中接种，用无菌接种环或针头。
- 将板在35-37℃温育24小时。
- 然后观察底片上指示器颜色的变化。
脱氧核糖核酸酶(DNase)
图:DNA水解。积极的-金黄色葡萄球菌;积极的-粘质沙雷氏菌;和消极。图片来源:Bailey和斯科特的诊断微生物学。elewsvier。
没有指标
- 加入1N HCl后，菌落周围有一个清晰的区域显示阳性测试。
- 阴性试验是添加1N HCl后不存在透明区域。
带指示剂(甲苯胺蓝O)
- 阳性试验是通过在菌落或琼脂孔周围出现粉红色或红色晕来证明的。
- 如果培养基的宝蓝色没有变化，则为阴性。
| S.N | 生物 | 生长 | 结果 |
| 1。 | 粘质沙雷氏菌 | 华丽的 | 阳性测试;当使用1N HCl淹没时，在使用甲苯胺蓝色/透明区域时，从蓝色围绕殖民地的颜色变为粉红色。 |
| 2。 | 金黄色葡萄球菌副．金黄色葡萄球菌 | 华丽的 | 阳性测试;当使用1N HCl淹没时，在使用甲苯胺蓝色/透明区域时，从蓝色围绕殖民地的颜色变为粉红色。 |
| 3. | 葡萄球菌epidermidis | 好 | 消极的;菌落周围的颜色/ np清除没有变化。 |
| 4。 | 酿脓链球菌 | 华丽的 | 阳性测试;当使用1N HCl淹没时，在使用甲苯胺蓝色/透明区域时，从蓝色围绕殖民地的颜色变为粉红色。 |
脱氧核糖核酸酶的用途
- 脱氧核糖核酸酶试验用于检测生物体产生脱氧核糖核酸酶的能力。
- 这个测试也可以用来区分S.金黄色葡萄球菌从其他葡萄球菌物种。
- 它是用来区分的Serratia.因为它产生一种dna酶，将非色素菌株从大多数其他菌株中分离出来肠杆菌膜。
脱氧氧化酶（DNase）的局限性
- 由于染料还原，宽或大型接种物可能导致介质的完全脱色。如果这种情况，必须重复测试。
- 含有甲基绿色的培养基对于诸如革兰氏阴性棒的生物体更好，首先在培养基上生长，然后证明阳性测试。
- 为了Moraxella.和革兰氏阳性球菌与Toulidine green O测试，低接种量可能导致假阴性测试，因为这些微生物可能不能在培养基上生长良好。
引用和来源
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