东部污染定义，原理，步骤，结果，应用

东污染定义

东部污染是一种分子生物学技术，用于检测蛋白质中的翻译后修饰以及组分的存在脂质和碳水化合物。

• 东部污染被发现为更受欢迎的Western印迹技术的延伸。
• 主要进行东部印迹以检测不同的生物分子的存在蛋白质，可用于研究差异翻译后修改在不同的物种中。
• 该方法的原理和程序在所有印迹技术中类似;然而，待检测的分子或颗粒可能不同。
• 东部印迹略微修改，形成一种新的印迹技术，称为远期印迹，用于研究分开的脂质色谱法。

东污染原则

• 东部印迹原理类似于其他印迹技术的原理。
• 它是一种免疫印迹技术，其取决于感兴趣的蛋白质与探针之间的特异性，以鉴定不同分子混合物中感兴趣的生物分子。
• 在东方印迹的情况下，蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶上电泳，以将它们与混合物分离。
• 然后将蛋白质转移到硝化纤维素或尼龙膜中，其中通过其与探针的特异性相互作用来检测靶分子。
• 可以通过使用放射性探针或通过使用次级标记分子来进行相互作用的鉴定埃莉莎。
• 与所有其他印迹技术一样，东方印迹是基于抗原 - 抗体相互作用互动的特异性和程度决定了结果。
• 东部印迹类似于凝集素印迹，因为它们两者主要用于检测蛋白质和脂质上的碳水化合物表位。
• 用于检测较小分子化合物的东部印迹是必不可少的，因为不能通过免疫染色来实现这些分子的检测。

要求

以下是东部污染的要求;

1. 薄层色谱法盘子
2. 转移膜
3. 纳奥_4.解决方案
4. 斑点溶液
5. NA.₂CO._3./ Nahco._3.
6. 不锈钢板

东风程序

以下是东风的协议;

1. 色谱后显影的TLC板用PVDF膜覆盖，以通过压制或加热将内容物从板转移到膜。
2. 通过使电流通过结构，也可以通过使电流通过结构来从TLC板转移到膜中。
3. 然后用钠碘乙烯处理膜以固定膜上的组分。将其在溶液中孵育1小时，用水洗涤。
4. 将膜浸入碱性条件下的BSA溶液中（Na₂CO._3./ Nahco._3.缓冲液制备在膜上的Hapten-BSA缀合物。
5. 它被含有5％的脱脂乳/ PBS封闭3小时，用PBS洗涤。膜由MAb处理，检测Hapten。
6. MAB与HAPTEN之间的相互作用构成了东部印迹的基础，以进行其检测。
7. 然后可以通过加入用过氧化物酶标记的第二抗体来检测mAb。
8. 最后，将底物添加到膜中，这有助于通过染色对第二抗体的可视化。

结果解释

• 东部印迹的结果取决于第二抗体中使用的标签类型。
• 积极的结果由颜色或放射性的外观表示。
• 负面结果由缺乏颜色或放射性表示。

东污染的应用

• 东部印迹最重要的应用是蛋白质中翻译后修饰的分析。
• 该技术已用于识别和纯化不同的植物产品。
• 东部印迹还允许检测不同起源的蛋白质的修饰。
• 它还有助于通过使用配体研究不同分子之间的相互作用的性质。
• 东方印迹已被广泛地用于比较从不同细菌物种获得的蛋白质中的修饰。
• 它还用于检测不同蛋白质中的碳水化合物表位。

东部印迹的局限性

• 该技术复杂且包含多个易于错误的步骤。它还需要培训的人员使用。
• 该技术需要使用大量样品，这可能是在产量不大的生产情况下的问题。
• 东部印迹难以准确地定量蛋白质和生物分子。
• 在某些情况下，探针与生物分子之间的相互作用可能导致第三级的破坏蛋白质的结构。

参考

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来源

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• https://www.bosterbio.com/protocol-and-troubleshooting/western-blot-principle - 5％
• https://en.wikipedia.org/wiki/western_blot - 4％
• https://www.academia.edu/9434790/qualitative_analysis_of_carbo水合物 - 2％
• https://www.sciencearirect.com/topics/neuroscience/southern-blot - 2％
• https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/s0022231315308747 - 1％