endospore染色 - 类型，原则，程序和解释

介绍

一个正常的细菌细胞被称为植物的营养形式细菌细胞．当提供营养、温度、水和氧气等有利的环境条件时，它可以自由繁殖。但有些团体的细菌,当暴露在不利条件下这样的我们,缺乏营养、氧气或者二氧化碳供应不足,缺乏水和水分,他们有能力形成一个保护层来保护自己当他们暴露于恶劣环境条件舒适的适应这些条件。这种特殊的结构被称为endospore.．

内孢子是一种non-vegetative结构由一组属于厚壁菌科的细菌产生。它们有特殊的特性，使它们能够在不利的条件下长时间生存。

这些包括;休眠的阶段，坚韧的外覆盖物，它们是名为孢子的不生殖形式，这为高温，辐射和消毒剂和酸等化学品提供了极大的抵抗力。这使得它们能够存活，因此它们难以染色，并且因此涂抹使用特殊染料的特殊染色以及热蒸汽。该染色技术被称为腹腔染色，也被称为孢子污渍。主要用于检测和鉴定细胞中的细菌腹腔和细菌营养形式的存在。

这些形成的胚胎形成细菌的实例包括Clostridium spp.和芽孢杆菌spp．这些细菌在土壤中自然生长，但它们通过引起人类细菌感染而具有很大的临床意义Tetani Clostridium.引起破伤风,肉毒梭状芽胞杆菌产生导致瘫痪的肉毒杆菌毒素芽孢杆菌引致食物中毒及炭疽杆菌引起牛和人的炭疽热。

内生孢子染色技术根据所用试剂的类型进行分类;

1. Schaeffer富尔顿染色,使用孔雀石绿染料和藏红花素
2. 腹腔孢子染色的Dorner方法 -使用Carbolfuchsin染色，酸性酒精和硝素溶液）

图像来源：微生物学信息

孢子内染色的目的

1. 检测endospore的存在。
2. 鉴定产生内生孢子的细菌
3. 以区分营养形态和内孢子

原则

Endospore染色是一种差异染色，旨在检测，鉴定和区分从营养细胞（欠发达的腹腔）的腹腔孢子。作用的原则是检测腹腔的存在或不存在，但是一些程序通过增加染料的浓度来修改技术，增加了热固定的持续时间，紫外线辐射的应用。

随着显微镜技术的改进，一些使用了相位对比显微镜，它是快速的，它可以产生更详细的细菌内孢子的形态。

1.Schaeffer富尔顿染色

在基础实验室中，最简单的内生孢子染色技术是Schaeffer-Fulton法，因为它简单、快速地识别细菌。它适用于孔雀石绿染料（具有pH为11-11.2的碱性溶液及其一种水溶性染料）以及使用蒸汽的热量，使侧孢子覆盖物允许染料渗透到孢子中。孔雀石绿色染料温和地与孢子粘合，如果用水洗涤，可以轻松地洗涤，它很容易脱离，这就是为什么蒸汽的应用对于让染料渗透到腹腔内是重要的。用作脱色剂，从营养形式远离孔雀石染料。最后，使用a复染色,番红精试剂,又称二次染色，是指孔雀石染料被脱色剂(水)洗去后，对发育不全的Furmigates植物的营养形态进行染色。

孔雀石绿色染料和Safranin在细菌中运作良好，因为孔雀石绿色试剂的碱性性质，而在细菌细胞的细胞质是嗜碱性的同时，孔雀石绿色染料与细菌细胞之间存在吸引力，使其更容易吸收染料。显微镜下的细胞的可视化将显示粉红色染色的外观，用于营养细胞形式，其占据封闭症，而肠孢子将作为绿色虚线颗粒（椭圆），占用孔雀石绿色染料。

试剂

1. 孔雀石绿染料
2. 水(Decoloriser)
3. Safranin.

过程

设备：载玻片，接种回路，本生灯

显微镜载玻片的制备（适用于所有其他腹孔染色技术）

1. 用酒精清洁玻璃载玻片（有可见圆圈），以去除任何污渍。
2. 用无菌接种环，放两个小的每个圆圈里都有水滴。
3. 无菌性地，用细菌培养打开管，并将其燃烧在顶部，并从管中收集一圈细菌培养物，再次使管熔断并关闭。
4. 在载玻片上的水滴中涂抹细菌培养物。
5. 晾干直至完全干燥。
6. 将涂片朝上加热固定，在蓝色火焰上运行3-4次注:不要用火焰将细菌燃烧
7. 待其冷却后开始染色。

解释的结果

植物人形成染色粉红色/红色，因为它们占据了胚胎（Safranin），而肠孢子从孔雀石绿色占据绿色。

这是因为，在涂抹和热固定期间，孔雀石绿色伴随着从蒸汽的热量的热量渗透到腹腔内，并且在水冲洗过程中，染料不容易被清洗。

对于营养体来说，染料很容易被洗掉，因为它们的外壳很脆弱，因此它们占据了最后一个污点，也就是复污点，因此它们呈现出粉红色。

2.多纳染色法

试剂:

Carbolfuchsin污渍，

脱色溶剂(acid-alcohol)

占有占（硝苯乙烯解决方案）

过程

(显微载玻片的制备采用上述步骤)

染色过程

1. 用吸水纸盖住污迹。
2. 用胭脂红浸透，在沸水浴或烧杯上蒸5-10分钟，同时向涂抹处添加更多染料。
3. 取下吸水纸，用酸-醇脱色1分钟;用自来水冲洗，然后拧干。
4. 加入一薄膜的黑素试剂作为反染色。
5. 在油浸透镜头（1,000x）下的载玻片可视化肠孢子的存在。

结果

植物细胞出现无色，而肠孢子是红色的。

内孢子染色的应用

1. 用于厚壁菌群的检测梭状芽胞杆菌SPP和芽孢杆菌仕达屋优先计划
2. 用于鉴定样品中产生内生孢子的细菌
3. 使产生孢子的细菌从营养形态的细菌中分化出来

腹腔染色的优点

• 作为一种鉴别染色剂，可以让你识别具有内孢子的特定细菌
• 它还允许检测和存在的营养形式在细菌培养，除了识别存在内生孢子产生细菌。

缺点

• 它只能明确地识别形成内生孢子的细菌的存在

请注意

• 另一种不常用的孢子内染色技术被称为克莱因法孢子内染色。
• 这些Shcauffer Fulton和Klein染色技术的区别在于染料的应用，即在Schahuffer Fulton染色中，使用孔雀石绿染料，而在Klein方法中，使用亚甲基蓝溶液。

参考文献

1. 关键词:亚甲基蓝，Schaufferton，细菌内孢子染色物理学报,2017。
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互联网资源

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