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- 曙红亚甲基蓝(EMB)琼脂是一种不同的微生物培养基,略微抑制革兰氏阳性菌的生长,并提供一种颜色指示剂,用于区分发酵乳糖的生物体(例如。,大肠杆菌)以及那些没有(例如。,沙门氏菌).
- EMB琼脂最初由Holt Harris和Teague设计,并由Levine进一步改进。
- 因此,它是Levine和Holt Harris以及Teague配方的组合,其中包含Levine建议的动物组织和磷酸盐的消化物,以及Holt Harris和Teague建议的两种碳水化合物。
- 在医学实验室中,培养基对于在短时间内鉴别革兰氏阴性病原微生物非常重要。
EMB琼脂的组成
成分 | 克/升 |
动物组织消化 | 10 |
磷酸二钾 | 2 |
乳糖 | 5 |
蔗糖 | 5 |
曙红-Y | 0.400 |
亚甲蓝 | 0.065 |
琼脂 | 13.500 |
最终pH值(25°C时):7.2±0.2
EMB琼脂的原理
- EMB琼脂的特点是以6:1的比例存在两种染料曙红和亚甲基蓝的组合。
- 发酵乳糖的革兰氏阴性细菌产生的酸会降低pH值。这会促进菌落对染料的吸收,并在酸作用于染料时使菌落变成深紫色。
- 此外,某些乳糖发酵细菌产生平坦、黑暗的菌落,带有绿色金属光泽。
- 其他乳糖发酵罐产生更大的粘液菌落,通常仅在其中心呈紫色。
- 在EMB琼脂中,大多数菌株大肠杆菌菌落具有特征性的绿色光泽。乳糖的快速发酵和强酸的产生,因此EMB琼脂pH值的快速降低是形成绿色金属光泽的关键因素大肠杆菌,乳糖的快速发酵和强酸的形成。
- 另一方面,乳糖非发酵罐可能通过蛋白质脱氨作用增加pH值。这确保染料不会被吸收。菌落将无色。
- 因此,乳糖非发酵罐要么无色,要么淡紫色。
- 动物组织的消化物是碳、氮和其他必需生长营养素的来源。
- 乳糖和蔗糖是可发酵的碳水化合物,是能量的来源。
- 曙红Y和亚甲基蓝作为鉴别指标。磷酸盐缓冲培养基。
EMB琼脂的制备和使用方法
- 将35.96克悬浮在1000毫升蒸馏水中。
- 搅拌至悬浮液均匀。加热至沸腾,使介质完全溶解。
- 在15磅压力(121°C)下高压灭菌15分钟。避免过热。
- 冷却至45-50°C并摇动培养基,以氧化亚甲基蓝(即恢复其蓝色)并悬浮絮凝剂沉淀物。
- 倒入无菌培养皿中。
- 让盘子加热到室温。
- 接种前,琼脂表面应干燥。
- 采集样本后,尽快接种并划线。
- 如果要培养的样本在拭子上,将拭子滚动到琼脂表面的一小块区域上,并用无菌环进行划线分离。
- 将平板在35-37°C有氧培养18-24小时,并避光。
- 检查培养皿的菌落形态。如果24小时后呈阴性,则再进行24小时的培养。
EMB琼脂的结果解释
有机体 | 发育 |
大肠杆菌 | 蓝黑色的牛眼;可能有绿色的金属光泽 |
铜绿假单胞菌 | 无色的 |
产气肠杆菌 | 生长良好;粉红色,无光泽 |
肺炎克雷伯菌 | 粉红色粘液菌落 |
奇异变形杆菌 | 茂盛的生长;无色菌落 |
沙门氏菌鼠伤寒 | 茂盛的生长;无色菌落 |
EMB琼脂的用途
- 建议使用EMB琼脂(曙红亚甲基蓝琼脂)从临床和非临床标本中分离和分化革兰氏阴性肠道细菌。
- 它有助于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
- 它有助于分离和区分肠道杆菌和革兰氏阴性杆菌。
- 它用于测试水质,特别是确定水是否受到有害微生物的污染。
- 它区分结肠伤寒痢疾组中的微生物。
- 教统局媒体协助视觉识别大肠杆菌,其他非致病性乳糖发酵肠道革兰氏阴性杆菌,以及沙门氏菌和志贺菌属。
- 它还有助于乳糖发酵和非乳糖发酵肠道杆菌的分离和分化。
EMB琼脂的局限性
- 非选择性培养基应与EMB琼脂一起接种。
- 建议对纯培养的菌落进行生化、免疫学、分子或质谱检测,以进行完整鉴定。
- 一些菌株沙门氏菌和志贺菌可能无法在EMB琼脂上生长。
- 一些革兰氏阳性细菌,如肠球菌、葡萄球菌和酵母菌将在此培养基上生长,通常形成精确的菌落。
- 非致病性、非乳糖发酵的生物体也将在此培养基上生长。必须进行额外的生化测试,以便将这些生物体与致病菌株区分开来。
- 可能需要连续接种,以确保充分分离混合菌群样本。
- 一些菌株大肠杆菌可能无法产生特有的绿色金属光泽;因此,绿色金属光泽不是诊断性的大肠杆菌.
工具书类
- https://laboratoryinfo.com/emb-agar-eosin-methylene-blue-agar/
- https://microbeonline.com/eosin-methylene-blue-emb-agar-composition-uses-colony-characteristics/
- http://himedialabs.com/TD/M317.pdf
- https://microbeonline.com/eosin-methylene-blue-emb-agar-composition-uses-colony-characteristics/
- https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/EMBAgar.htm
- https://bio.libretexts.org/Ancillary_Materials/Experiments/Microbiology_Labs_I/23%3A_Eosin_Methylene_Blue_Agar_(教统局)