曙红亚甲基蓝(EMB)琼脂

  • 曙红亚甲基蓝(EMB)琼脂是一种不同的微生物培养基,略微抑制革兰氏阳性菌的生长,并提供一种颜色指示剂,用于区分发酵乳糖的生物体(例如。,大肠杆菌)以及那些没有(例如。,沙门氏菌).
  • EMB琼脂最初由Holt Harris和Teague设计,并由Levine进一步改进。
  • 因此,它是Levine和Holt Harris以及Teague配方的组合,其中包含Levine建议的动物组织和磷酸盐的消化物,以及Holt Harris和Teague建议的两种碳水化合物。
  • 在医学实验室中,培养基对于在短时间内鉴别革兰氏阴性病原微生物非常重要。

曙红亚甲基蓝(EMB)琼脂

EMB琼脂的组成

成分 克/升
动物组织消化 10
磷酸二钾 2
乳糖 5
蔗糖 5
曙红-Y 0.400
亚甲蓝 0.065
琼脂 13.500

最终pH值(25°C时):7.2±0.2

EMB琼脂的原理

  • EMB琼脂的特点是以6:1的比例存在两种染料曙红和亚甲基蓝的组合。
  • 发酵乳糖的革兰氏阴性细菌产生的酸会降低pH值。这会促进菌落对染料的吸收,并在酸作用于染料时使菌落变成深紫色。
  • 此外,某些乳糖发酵细菌产生平坦、黑暗的菌落,带有绿色金属光泽。
  • 其他乳糖发酵罐产生更大的粘液菌落,通常仅在其中心呈紫色。
  • 在EMB琼脂中,大多数菌株大肠杆菌菌落具有特征性的绿色光泽。乳糖的快速发酵和强酸的产生,因此EMB琼脂pH值的快速降低是形成绿色金属光泽的关键因素大肠杆菌,乳糖的快速发酵和强酸的形成。
  • 另一方面,乳糖非发酵罐可能通过蛋白质脱氨作用增加pH值。这确保染料不会被吸收。菌落将无色。
  • 因此,乳糖非发酵罐要么无色,要么淡紫色。
  • 动物组织的消化物是碳、氮和其他必需生长营养素的来源。
  • 乳糖和蔗糖是可发酵的碳水化合物,是能量的来源。
  • 曙红Y和亚甲基蓝作为鉴别指标。磷酸盐缓冲培养基。

EMB琼脂的制备和使用方法

  1. 将35.96克悬浮在1000毫升蒸馏水中。
  2. 搅拌至悬浮液均匀。加热至沸腾,使介质完全溶解。
  3. 在15磅压力(121°C)下高压灭菌15分钟。避免过热。
  4. 冷却至45-50°C并摇动培养基,以氧化亚甲基蓝(即恢复其蓝色)并悬浮絮凝剂沉淀物。
  5. 倒入无菌培养皿中。
  6. 让盘子加热到室温。
  7. 接种前,琼脂表面应干燥。
  8. 采集样本后,尽快接种并划线。
  9. 如果要培养的样本在拭子上,将拭子滚动到琼脂表面的一小块区域上,并用无菌环进行划线分离。
  10. 将平板在35-37°C有氧培养18-24小时,并避光。
  11. 检查培养皿的菌落形态。如果24小时后呈阴性,则再进行24小时的培养。

EMB琼脂的结果解释

有机体 发育
大肠杆菌 蓝黑色的牛眼;可能有绿色的金属光泽
铜绿假单胞菌 无色的
产气肠杆菌 生长良好;粉红色,无光泽
肺炎克雷伯菌 粉红色粘液菌落
奇异变形杆菌 茂盛的生长;无色菌落
沙门氏菌鼠伤寒 茂盛的生长;无色菌落

EMB琼脂的用途

  • 建议使用EMB琼脂(曙红亚甲基蓝琼脂)从临床和非临床标本中分离和分化革兰氏阴性肠道细菌。
  • 它有助于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
  • 它有助于分离和区分肠道杆菌和革兰氏阴性杆菌。
  • 它用于测试水质,特别是确定水是否受到有害微生物的污染。
  • 它区分结肠伤寒痢疾组中的微生物。
  • 教统局媒体协助视觉识别大肠杆菌,其他非致病性乳糖发酵肠道革兰氏阴性杆菌,以及沙门氏菌志贺菌属。
  • 它还有助于乳糖发酵和非乳糖发酵肠道杆菌的分离和分化。

EMB琼脂的局限性

  • 非选择性培养基应与EMB琼脂一起接种。
  • 建议对纯培养的菌落进行生化、免疫学、分子或质谱检测,以进行完整鉴定。
  • 一些菌株沙门氏菌志贺菌可能无法在EMB琼脂上生长。
  • 一些革兰氏阳性细菌,如肠球菌、葡萄球菌和酵母菌将在此培养基上生长,通常形成精确的菌落。
  • 非致病性、非乳糖发酵的生物体也将在此培养基上生长。必须进行额外的生化测试,以便将这些生物体与致病菌株区分开来。
  • 可能需要连续接种,以确保充分分离混合菌群样本。
  • 一些菌株大肠杆菌可能无法产生特有的绿色金属光泽;因此,绿色金属光泽不是诊断性的大肠杆菌.

工具书类

  1. https://laboratoryinfo.com/emb-agar-eosin-methylene-blue-agar/
  2. https://microbeonline.com/eosin-methylene-blue-emb-agar-composition-uses-colony-characteristics/
  3. http://himedialabs.com/TD/M317.pdf
  4. https://microbeonline.com/eosin-methylene-blue-emb-agar-composition-uses-colony-characteristics/
  5. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/EMBAgar.htm
  6. https://bio.libretexts.org/Ancillary_Materials/Experiments/Microbiology_Labs_I/23%3A_Eosin_Methylene_Blue_Agar_(教统局)

留言

该网站使用Akismet来减少垃圾邮件。了解如何处理您的评论数据.