esculin水解试验 - 原理，程序，结果，用途

埃斯林水解试验是什么？

埃斯林水解是一种有用的测试，其覆盖着覆盖广谱的Aerobes，兼容性厌氧菌和厌氧物的革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的分化。esculin水解用作分类工具在鉴定各种微生物，包括肠杆菌痤疮膜，属链球菌和Listeria，非发酵革兰阴性杆菌和厌氧。埃苏林水解是一种差异试验，在其水解脓性的能力的基础上区分细菌。

该测试可以通过向培养基添加胆汁来选择性，称为胆汁纤维蛋白测试。
通过细菌水解脓疱素可以在vaugn-levine，胆汁纤维蛋白或辉瑞选择性肠球菌等的生长支撑介质中测定或通过类似病程和快速点测试的非生长支撑方法。
esculin水解试验是基于esculin(一种葡萄糖苷)被一种具有结构性β-葡萄糖苷酶或esculinase酶的微生物水解成葡萄糖和esculin。

脓版水解试验的目标

检测生物体通过产生食糖酶水解食糖素的能力。
以区分和识别成员肠杆菌科家庭。

埃斯林水解试验原理

esculin是一种β-葡萄糖-6,7-二羟基草林，一种衍生自马栗树的化合物（亚肯水海马）。
该化合物可以在8-葡萄糖连杆下酶促水解，得到两种产物，eSculetin和葡萄糖。
通过检测最终产物Esculetin通常确定尖林水解。
Esculetin与铁离子组合，通常在培养基中掺入柠檬酸铁铵中，以产生棕色黑色的化合物。
或者，可以通过检测由发酵产生的pH的变化来确定最终产物葡萄糖。该方法仅限于发酵葡萄糖的生物。
在实验室中进行的苏林素水解试验中，Esculetin和铁离子之间的反应形成黑色化合物，可以在壁素琼脂上或通过壁素点测试检测。

微生物检测

链中的革兰氏阳性Cocci，其在过氧化氢酶阴性和形态学上被确定为推定链球菌Bovis。
作为α-或γ-溶血性的微生物，革兰氏阳性Cocci作为来自其他肠球菌的分化的一部分吡咯烷基-β-萘酰胺（Pyr）- 阳性生物。
非孢子成形，溶血，革兰阳性棒，其阳性和形态学推测为listeria。
用革兰氏阳性Cocci的正血液培养物在链或革兰氏阳性棒中，迅速（4小时）鉴定肠球菌和listeria。
脓版水解用于鉴定氧化酶阳性有氧革兰氏阴性棒，包括航空罗马斯SPP。和黄色着色的非葡萄糖发酵棒。

使用的媒体，试剂和用品

媒体使用

Esculin琼脂用于检测脓叶素的水解。介质是差动介质，可以通过添加胆汁来选择性。
埃斯库林琼脂的组成如下:

S.N.	原料	克/升
1。	酪蛋白水解酶	13.0
2。	酵母抽提物	5.0
3.	牛心液(固体)	2.0
4.	氯化钠	5.0
5。	铁柠檬酸盐	0．5
6。	琼那	15.0
最终pH在25°C：7.3±0.2

试剂使用

对于Esculin斑点测试，在蒸馏水中制备0.02％脓霉素溶液。

用品使用

长波（360-nm）紫外线
无菌棒，针或接种环
巴斯特液体吸管或吸管
沸腾热块
在35和30°C的培养箱

脓版水解试验的程序

A.媒体的准备

在烧杯中，将41.5克脱水粉末或实验室制备的介质加入到1000毫升的蒸馏水中。
然后通过搅拌加热至沸腾以溶解溶解介质。
然后将溶液分配到螺纹封端管（每个约3ml）中，并在15磅压力（121℃）的高压釜中灭菌15分钟。
高压灭菌后取出管子，并在倾斜位置冷却到温度约40-45°C。位置应保持在一个角度，以达到1.5 - 2.0厘米的深度。

B.水解试验

可以通过管试验或脓性点测试观察到脓林水解。现场测试是一种快速测试。

1.管试验

轻接种物是由18-24小时的培养与无菌接种针头从一个良好隔离的菌落的中心。
通过用从培养板拾取的光移植物将倾斜的表面传导倾斜的表面来接种纤维蛋白琼脂管。
应覆盖试管的盖子，以确保足够的通气。
然后将接种管在35-37℃下在空气中孵育24小时（或者对于生长缓慢的革兰氏阴性棒和厌氧体），或多左右7天），并且观察到颜色变化。
如果使用没有铁（III）柠檬酸盐的Esculin肉汤，则每天观察管子，用于用UV光丢失荧光。
在荧光丧失的情况下，向试管中加入2或3滴1%柠檬酸铁铵，观察到颜色的变化。

2. esculin现货测试

在蒸馏水中制备0.02％脓素溶液，然后通过高压灭菌或通过过滤灭菌进行无菌。
将滤纸放置在标准显微镜载玻片上，定位在支撑玻璃棒上。
在避免纸张的过度饱和的同时将脓林溶液移液。
接种物衍生自24小时细菌殖民地，其中木棒在滤纸中心摩擦。
然后将载玻片在37℃温育约10-15分钟。虽然Klebsiella通常在10至15分钟内产生阳性测试，但是在呼叫阴性之前，应该在30分钟内保持测试。
在弱光下使用手持木灯，观察到荧光的损失。

控制生物

积极的：肠球菌粪便器
负面:大肠杆菌

脓林水解试验的结果解释

图:脓叶水解试验的结果解释。图像来源：Bailey和斯科特的诊断微生物学。elewsvier。

培养基的黑化在于具有铁柠檬酸铁的纤维蛋白培养基中的正管试验。
缺乏颜色变化演示了负管测试。
通过荧光丧失证明了阳性点测试，导致UV光下的黑色斑点。
通过明亮的荧光证明了阴性试验，表明脓素浓度没有减少。

脓林水解试验的用途

埃斯库林水解试验用于多种微生物的鉴定，包括肠杆菌科、链球菌和李斯特菌属、非发酵革兰氏阴性杆菌和厌氧菌。
该测试可用于确定生物体水解埃斯库林或产生埃斯库林酶的能力。
测试可以选择性链球菌通过添加胆汁解决方案的物种。

埃斯库林水解试验的局限性

几个生物产生H.₂在新陈代谢期间，这可能与熨斗反应产生黑色复合物并干扰脓性水解试验的解释。因此，对于革兰氏阴性棒，在紫外光下加入试剂后，检查管道。
一些微生物，如大肠杆菌，具有诱导型β-葡糖苷酶，仅在长时间孵育（最多7天）后才能给出阳性结果。但是，如果测试用于检测组成型β-葡糖苷酶，则不应使用长时间孵育。

参考资料和来源

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