鞭毛染色-原理、步骤和结果解释

鞭毛染色的目的

该技术用于可视化鞭毛的存在和排列，以推定识别活动细菌种类。

鞭毛染色原理

鞭毛太薄了，用普通染色(如革兰氏染色或简单染色)的明亮视野显微镜无法观察到。湿贴法用于细菌鞭毛染色，当鞭毛的数量和排列对运动细菌的种类鉴定至关重要时，这种染色方法简单而有用。染色过程需要使用媒染剂，使染色物分层附着在鞭毛上，使其可见。

鞭毛染色程序(湿贴法)

1. 将微生物在室温下在血琼脂上培养16至24小时进行染色。
2. 在显微镜载玻片上加一小滴水。
3. 将无菌接种环浸入无菌水中。
4. 将这一圈水轻轻接触菌落边缘(这样可以让活动的细胞游到水滴中)。
5. 把满圈的活动细胞碰在载玻片上的水滴上。注意:在载玻片上的水滴中搅动环会使鞭毛剪切掉细胞。
6. 用盖玻片盖住滑梯上模糊的水滴。一个合适的湿坐垫只有足够的液体填满盖套下的空间。最好是边缘周围有小空间。
7. 检查载玻片在40× 50×以下是否有活动细胞。如果没有看到活动细胞，不要继续染色。
8. 如果发现有活动细胞，将载玻片置于室温下5 - 10分钟。这使细菌细胞有时间粘附在玻片或盖上。
9. 轻轻地在封面边缘涂抹2滴RYU鞭毛染色剂(雷梅尔，伦内萨，堪萨斯州)。染色剂通过毛细管作用流动，并与细胞悬浮液混合。湿底座边缘周围的小气囊有助于辅助毛细作用。
10. 在室温下5到10分钟后，检查细胞是否有鞭毛。
11. 在100×(油)的最佳染色浓度区域，大约从封面边缘到贴体中心的一半，可以观察到有鞭毛的细胞。
12. 将显微镜聚焦在附在载玻片上的细胞上，而不是附在载玻片上的细胞上，便于观察鞭毛。污渍的沉淀物主要在载玻片上，而不是盖玻片上。

鞭毛染色结果的解释

1. 有或无鞭毛
2. 每个细胞的鞭毛数
3. 每个细胞鞭毛的位置
   1. 周毛的
   2. 丛鞭毛的
   3. 极地
4. 波长的振幅
   1. 短
   2. 长
5. 是否“丛生”

限制

即使是一种特定的染色，鞭毛的可视化也需要有经验的实验室科学家，而不是入门级的技术。

质量控制

周毛的:大肠杆菌
极性:铜绿假单胞菌
负面:肺炎克雷伯菌

鞭毛染色-原理、步骤和结果解释