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- 凝胶渗透色谱也称为凝胶过滤或尺寸排阻色谱。
- 在尺寸排阻色谱中，固定相是由诸如交联聚苯乙烯，交叉葡聚糖，聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶等的化合物组成的多孔基质。
- 分离基于分析物分子尺寸，因为凝胶表现类似于分子筛。
- 该技术用于分离蛋白质，多糖，酶和合成聚合物。
- 作为一种技术，首先于1955年通过车床和ruthven开发尺寸排阻色谱。
凝胶渗透色谱原理
- 它是一种技术，其中部件的分离基于分子量或尺寸的差异。
- 使用的固定相是多孔聚合物基质，其孔完全填充有溶剂以用作流动相。
- 样品中的分子通过含有这种微孔包装材料（凝胶）的专用柱泵送。
- 分离的基础是，上述一定尺寸的分子被完全从孔中排除，而较小的分子部分或全部地进入孔的内部。
- 因此，流动阶段的流动将导致较大的分子通过柱子阻止，而不渗透凝胶基质，而较小的分子将根据它们的凝胶的渗透而延迟。
凝胶渗透色谱法的组分/仪器
- 固定阶段
- 移动阶段
- 列
- 泵
- 探测器
A.固定阶段
它由半透透过的多孔聚合物凝胶珠组成，具有明确界定的孔径范围。
它具有以下属性：
- 化学惰性
- 机械稳定
- 具有理想和均匀的多孔结构（宽孔径给出低分辨率）。
- 均匀的颗粒和孔径。
凝胶的例子：
- 德克兰（Sephadex）凝胶：葡萄糖天然凝胶的α1-6-聚合物
- 琼脂糖凝胶：1,3连接的β-D-半乳糖和1,4个连接的3,6-α-α，L-半乳糖天然凝胶
- 丙烯酰胺凝胶：一种聚合的丙烯酰胺，合成凝胶
B.移动阶段
它由用于溶解生物分子的液体组成，使流动相使得允许高检测响应和润湿包装表面。
C.列
可以使用以下任何类类：
- 分析柱 - 7.5-8mm直径。
- 制备柱-22-25mm
- 通常柱长-25,30,50和60cm。
- 介绍了窄孔柱 - 2-3mm直径
D.泵
它们是注射器泵或具有高恒定流速的往复泵。
E.探测器
探测器可以是浓度敏感的探测器，散装性能探测器，折射率（RI）检测器等。
步骤凝胶渗透色谱法
它涉及三个主要步骤：
A.凝胶过滤柱的制备
它涉及：
- 凝胶肿胀
- 用明确限定的孔径范围填充柱半透孔的多孔聚合物凝胶珠。
- 洗涤：包装后，通过柱通过几柱缓冲溶液以除去任何气泡并测试柱均匀性。
B.使用注射器将样品加载到柱上
C.洗脱样品和检测组分
凝胶渗透色谱法的应用
- 蛋白质分馏
- 纯化
- 分子量测定。
- 糖，蛋白质，肽，橡胶和其他基于其尺寸的分离。
- 可用于确定纯化蛋白质的季结构。
凝胶渗透色谱的优点
- 短暂的分析时间。
- 定期分离。
- 窄带和良好的敏感性。
- 没有样品损失。
- 需要少量的移动阶段。
- 可以设置流量。
凝胶渗透色谱的局限性
- 可以在GPC运行的短时间规模中解决的有限数量的峰值。
- 必须在使用仪器之前进行过滤，以防止灰尘和其他颗粒从破坏柱并干扰探测器。
- 大多数链的分子量将太接近GPC分离以显示出宽峰的任何东西。
参考
- Wilson，K.，Walker，J.（2018）。生物化学与分子生物学的原理和技术（8埃德。）。剑桥大学出版社：纽约。
- https://www.slideshare.net/aSabuwangwa/gel-permeation-chromatography-gpc.
- http://www.materials-talks.com/blog/2016/08/30/an-introduction-to-gel-permeation-chromatograph_30-minutes/
- https://chromatatography.Confercesseries.com/Events-list/Applications-of-chromatogris.
- http://hibrary.umac.mo/ebooks/b28050630.pdf.
- https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc5206469/