克染色原理，试剂，程序，步骤，结果

克斑染色于1884年由基督徒克开发，并于1921年由哈卡尔修改。

革兰氏染色的目标

该测试将细菌区分为革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌，这有助于微生物的分类和分化。革兰氏染色将细菌分为两组：（1）革兰氏阳性微生物，其保留初级染料（晶体紫）和（2）革兰阴性微生物，其采用封闭的颜色（通常是Safranin O）。

革兰氏染色原理

两组主要的细菌可以分为革兰氏阳性和革兰氏阴性．革兰氏染色技术是基于两组细胞的细胞膜和细胞壁的不同结构。

革兰氏阳性菌含有高度交联的肽聚糖层，在使用媒染剂碘(I)后，肽聚糖保留初级染料结晶紫(CV)。碘和结晶紫在肽聚糖内形成复合物。当脱色剂应用于细胞时，CV-I复合物仍在细胞内，使其呈现深紫色至蓝色。

革兰氏阴性生物不含厚的交联肽聚糖层。肽聚糖在内电池和外部细胞膜之间松散地分布。在施加晶体紫和碘后，CV-I复合物没有被困在肽聚糖中。将酸醇脱色剂脱水外蜂窝膜，留在膜中的孔，从细胞中有效洗涤或除去CV-I复合物。细胞显得无色。为了使无色细胞可见，施加二次染色，野生植绒，留下革兰氏阴性细胞粉红色。

革兰氏染色剂试剂

主要污渍:结晶紫2克，95%乙醇20毫升，草酸铵0.8克，蒸馏水100毫升。
克的碘：2g碘化钾，1g碘晶体和100ml蒸馏水。
脱色剂：50毫升丙酮和50毫升乙醇。
馆员：4.0g Safranin，200ml 95％乙醇，800毫升蒸馏水

革兰污染的程序/步骤

1. 在染色之前，准备并固定到显微镜滑动。
2. 在涂片上盖上水晶紫，主要污渍，20秒。
3. 用水轻轻冲洗污渍。
4. 用克碘，媒染覆盖涂片1分钟。
5. 倒掉多余的克的碘。
6. 在涂片上运行酸性醇脱色剂直至溶液清晰。
7. 用水轻轻冲洗。
8. 在涂片上覆盖藏红花素，次级染色或复染色，20秒。
9. 用清水轻轻冲洗污渍。
10. 用吸水纸吸干。

革兰污染的结果解释

克阳性：蓝色/紫色
克否定：红色/粉红色

限制

1. 过度脱色可能导致假革兰氏阴性结果的识别，而不脱色可能导致假革兰氏阳性结果的识别。
2. 太厚或粘性的涂片可能会保留过多的主要污渍，使识别适当的革克污渍反应困难。革兰氏阴性生物可能无法正常脱色。
3. 比16到18小时的文化含有生活和死细胞。死亡的细胞将变质，不会适当地保持污渍。
4. 随着年龄的增长，污点会形成沉淀。用纱布过滤可以去除多余的晶体。
5. 患者抗生素或抗菌治疗患者的克污渍可能因成功治疗而改变革兰污染反应性。
6. 有时，肺炎球菌在直接涂片下呼吸道鉴定不会在培养中生长。有些菌株是专性厌氧菌。
7. 产生毒素的有机体，如梭状芽胞杆菌、葡萄球菌和链球菌，可能破坏化脓性标本中的白细胞。
8. 微弱地染色革兰氏阴性生物，如弯曲杆菌和布鲁氏菌，可用另一种复染剂(如碱性品红)显示。

例子

革兰氏阳性:链球菌，葡萄球菌，棒状杆菌，李斯特里亚，芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌,等。
克否定：大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌、淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、鼠疫耶尔森菌等。

进一步读物

• 14％ - https：//basicmedicalkey.com/role-of-microscopy/
• 3%——https://microbiologyinfo.com/gram-staining-principle-procedure-interpretation-examples-and-animation/
• 3％ - http://www.med-chem.com/pages/lab_procedures/pdf/gram_stain.pdf
• 1%——https://www.diffen.com/difference/Gram-negative_Bacteria_vs_Gram-positive_Bacteria
• 1％ - https://www.austincc.edu/microbugz/handouts/stain%20protocols.pdf
• 1%——https://en.wikipedia.org/wiki/Gram_staining
• 1％ - http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=73&sim=208&cnt=2
• 1％ - http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=73& sim=208&cnt=1

克染色原理，试剂，程序，步骤，结果