grocottgomori的Methenamine Silver染色

  • grocot - gomori的Methenamine Silver (GMS)染色是一种组织学染色,主要用于鉴定真菌微生物中的碳水化合物。
  • 这种染色方法以GyörgyGömöri的命名为来自匈牙利的医生,他们开发了染色方法。
  • 其初步应用于评估肝脏和直肠的缺失组织和疾病(Nadworny,Wang,Tredget,&Robert,2010)然后用于识别Pneumocystis jiroveci,一种众所周知的真菌,导致机会主义感染患有肺细胞症,免疫吞噬和免疫抑制患者。
  • 与其他染色剂如周期性酸-希夫染色剂和Gridley染色剂相比,Goromi对检测石蜡制备切片中的真菌和其他富含多糖的微生物具有更高的灵敏度。
  • Gomori的甲胺 - 硝酸银和铬酸包含常规Grocott污渍中使用的主要试剂
  • 它还已被用于鉴定组织切片中的真菌。
  • 其在组织学中的应用使其成为吸入,组织和涂片中真菌的检测和演示。

目标

  • 证明…的存在菌类在给定的样品中。
  • 证明…的存在Pneumocystis jiroveci组织胞浆菌属SPP。

Grocott-Gomori的甲磺胺银染色原理

真菌细胞壁由多糖组成,多糖与染色质酸相互作用,氧化形成醛。这可以通过碱-六甲基-银配合物的还原得到证明。

Grocott的碱性六胺 - 银溶液经历减少以形成银离子的沉淀物使真菌的细胞壁出现黑色反应称为阿根廷反应(细胞将银溶液减少到形成黑色组织元素的金属银溶液)。发现阿根廷细胞的肺部,肠和黑色素的上皮衬里。该反应驱动污渍结果的结果。

染色方法有两种:

  1. 常规方法在室温下进行
  2. 微波方法

试剂

三氧化铬溶液、亚硫酸氢钠溶液、硝酸银溶液、甲基胺溶液、硼砂溶液、氯化金溶液、硫代硫酸钠溶液、浅绿色原液。

准备的解决方案

笔记:这些试剂通常是成套的,用于手工准备,有些溶液已经准备好了

  • 铬酸(1.4%):三氧化铬4g + 100ml蒸馏水
  • 银溶液:3%甲烷胺/六甲氧胺23ml + 5%硝酸银1.25ml + 5%硼砂(四硼酸钠)3ml + 25ml蒸馏水
  • 3.2%氯金酸钠(氯化黄金):氯化金1.0g + 500ml蒸馏水
  • 4.2%硫代硫酸钠(吡啶):硫代硫酸钠2.0g + 100ml蒸馏水
  • 工作浅绿色股票溶液:1%乙酸+ 40ml蒸馏水中10ml 1%浅绿色

注意:根据需要染色的浓度准备解决方案。

grocottgomori的Methenamine Silver染色方法

传统程序

  1. 用蒸馏水水合物部分。
  2. 然后用4%的铬酸水溶液在室温下氧化该部分,并静置1小时
  3. 在水里洗几秒钟
  4. 用1%硫酸钠对待1分钟的部分
  5. 在顺畅的自来水中洗涤3分钟
  6. 用蒸馏水彻底冲洗
  7. 将载玻片放入60°C水浴中预热的工作银溶液中15 - 20分钟,直到切片变成黄褐色(显微镜下可以看到真菌变成深褐色)。
  8. 在蒸馏水中冲洗良好
  9. 在切片中加入0.2%的氯化金,静置2分钟
  10. 在蒸馏水中冲洗良好
  11. 用2%硫代硫酸钠对待2分钟的部分
  12. 用平滑运行的自来水洗涤5分钟
  13. 将封闭馆添加到浅绿色中15秒
  14. 用酒精将多余的浅绿色溶液冲洗掉
  15. 脱水,清除,堆积。

微波程序

  1. 将切片水合成蒸馏水。
  2. 将40ml 1. 4%含水铬酸水溶液放在松散覆盖的塑料Coplin罐中。
  3. 微波炉150瓦,2分30秒
  4. 将幻灯片上下浸入科普林瓶中,再放置2分钟
  5. 在平稳运行自来水30秒洗涤
  6. 将3.2%的硫酸钠加入到这些部分中,然后留下10秒钟,然后用自来水洗涤30秒。
  7. 在450瓦特预热工作银溶液60秒
  8. 用蒸馏水彻底冲洗玻片,然后将玻片放入热银溶液中。
  9. 用微波炉以150瓦的功率加热30秒
  10. 将幻灯片上下浸入科普林瓶中,再静置1分钟。用蒸馏水冲洗,置于显微镜下检查。请注意:如果染色不够充分,将载玻片重新浸入银溶液中,每1分钟检查一次,直到真菌染成深棕色。
  11. 用3.2%金氯化物30秒的剖面调,并用蒸馏水冲洗。
  12. 向切片中加入4.2%的硫代硫酸钠1分钟,用自来水冲洗15秒。
  13. 将浅绿色解决方案占据了15秒的部分。
  14. 用酒精冲洗浅绿色溶液
  15. 干,盖子。

结果

Grocott-Gomori的甲磺胺粉染色

数字:通过Grocott Methenamine银特殊污渍突出了真菌生物。菌丝宽4-6米;用非平行墙壁,非二分枝和末端散块扩张的胚胎真菌菌丝。来源:DOI:10.1177 / 1040638716640313

  • 菌类,Pneumocystis jirevoci组织胞浆菌属SPP污渍黑色的
  • 菌丝体和菌丝染色的内部部分酒色呈/玫瑰
  • 利什曼原虫,弓形虫
  • 粘蛋白染色深灰色
  • 背景占据了浅绿色和污渍浅绿色

解释

由于硝酸银溶液的还原过程,真菌会被染黑。硝酸银溶液还原后形成黑色的银离子,从而为真菌细胞产生黑色染色剂。

真菌菌丝和菌丝染色为玫瑰红/粉红色,而粘蛋白染色为深灰色也由于硝酸银还原为银离子。使用浅绿色溶液,背景将呈现淡绿色。

警告

  • 戴上手套、护目镜和实验服。在通风柜下面保持热的不封顶的溶液。避免接触和吸入染料和化学品。
  • 铬酸对皮肤和粘膜腐蚀性,对肾脏和ITA的高度毒性也非常致癌
  • 硫酸钠硫酸钠AIS有毒,如果摄入,会导致胃肠道痛苦和烦躁。它还刺激皮肤,眼睛和粘膜。
  • 硝酸银对皮肤和眼睛是一种刺激性。
  • 这种氧化剂如果被摄入,会引起剧烈的胃肠道不适,它可能是致癌的,因为它是一种致瘤剂。
  • 硫代硫酸钠在摄入中有毒,它会导致胃,皮肤,眼睛和呼吸道刺激。
  • 浅绿色SF黄色被认为是可能的致癌物。

grocottgomori的甲基胺银染色的应用

  • 用于鉴定组织切片中的真菌细胞
  • 用于将真菌细胞与细菌细胞分化
  • 还用于鉴定酵母样真菌,如Pneumocystis jiroveci

好处

  • 它是一种侵略性的污渍,可以牢固地固定染色部分,可以使用或将来的参考和观察。
  • TT可以区分真菌的真菌形态。

限制

  • 如果吸入这些化学试剂,会引起皮肤和胃肠道的刺激。
  • 这些试剂还具有致癌作用。

参考

  1. Grocott,R.G.1955年,染色于组织切片和涂片的真菌。美国临床病理学杂志,v25,p975
  2. Alturkistani,Hani&Tashkandi,Faris&Mohammedsaleh,Zuhair。(2015)。组织学污渍:文献综述和案例研究。全球卫生科学杂志。8. 10.5539 ​​/ gjhs.v8n3p72。
  3. http://www.ihcworld.com/_protocols/special_stains/grocott_methenamine_ellis.htm.
  4. https://www.clinisciences.com/autres-produits-186/grocott-methenamine-silver-stain-351002431.html.
  5. https://webath.med.utah.edu/histhtml/manuals/gms.pdf.
  6. https://www.researchgate.net/post/Which_stains_can_be_used_for_Staining_Fungi
  7. https://www.coursehero.com/file/p342qaq/Grocotts-methenamine-silver-staining-protocol-Principle-Chromic-acid-oxidation/
  8. https://www.reference.com/science/nitric-acid-stain-skin-yellow-9475502370e787b5.
  9. https://quizlet.com/185455989/histology-stains-flash-cards/
  10. http://pesticideinfo.org/detail_chemical.jsp?rec_id=pc33841

grocottgomori的Methenamine Silver染色

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