海马酸盐水解试验-原理,过程,结果,用途

海蒲酸盐水解试验定义

马尿酸水解试验是一种通过马尿酸酶的酶促作用将马尿酸水解为甘氨酸和苯甲酸的微生物进行区分的生化试验。

  • 传统的检测方法是用氯化铁指示剂检测苯甲酸,耗时较长。
  • 然而,如今该方法已被改进,并被用作一种快速检测甘氨酸的方法,即添加茚三酮作为指示剂。
  • 该测试将B组链球菌与不能水解马尿酸钠的A、C、F和G组链球菌区分开来。但部分D族和极少数青绿色链球菌也能水解马尿酸钠。
  • 这项试验利用了生物体水解马尿酸钠的能力。它是少数几种有助于区分牛β-溶血性B组链球菌和人β-溶血性B组链球菌的试验之一链球菌物种。

海蒲酸酯水解试验的目的

  • 目的检测水解底物马尿酸的马尿酸酶的产量。
  • 根据细菌水解河马酸的能力来区分细菌。

微生物检测

  • 假定l . monocytogenes:微小的革兰氏阳性棒,过氧化氢酶阳性,在25°C可活动,和-溶血。
  • 假定美国agalactiae:革兰氏阳性球菌,过氧化氢酶阴性,呈半透明菌落,具有典型的狭窄的-溶血区。
  • 假定c .空肠:弯曲的革兰氏阴性杆状体,是氧化酶和过氧化氢酶阳性,在35°C下不需有氧生长。
  • 假定g .鞘突:过氧化氢酶阴性,微小革兰氏变棒。

海蒲酸盐水解试验原理

马尿酸测试是基于生物体通过马尿酸酶的作用将马尿酸钠水解成苯甲酸和甘氨酸的能力。它主要用于鉴定空肠弯曲杆菌李斯特菌monocytogenes加德纳菌属鞘突,链球菌agalactiae。用氯化铁指示剂检测苯甲酸,对细菌水解河马酸的能力进行了经典的测试。然而,一个2小时的快速方法,而不是传统的48小时的方法,检测海马酸水解已经发展。这种快速测试以茚三酮为指示剂,它与任何蛋白质或氨基酸反应,在这种情况下,可以检测出甘氨酸。甘氨酸被茚三酮的氧化作用脱胺,而茚三酮的氧化作用导致茚三酮的还原,形成紫色的复合物。由于茚三酮与存在的任何游离氨基酸发生反应,所以所使用的试验培养基必须只有作为蛋白质来源的hippurate。对苯甲酸副产物的快速海马酸水解试验具有与经典方法相同的灵敏度和特异性。

河马酸→甘氨酸+苯甲酸

甘氨酸+茚三酮→紫色络合物

使用的介质,试剂和用品

试剂使用

Hippurate。解决方案

  • Hippurate试剂可以以脱水管或磁盘或片剂的形式在商业上找到。
  • 然而,它可以在实验室中作为1%的hippurate溶液制备。
  • 实验室制备时,在100ml蒸馏水中加入1g海马酸钠。

b。茚三酮

  • 茚三酮试剂也可以在商业上找到,但如果有必要的化学品,也可以在实验室中制备。
  • 在实验室制备茚三酮试剂时,将50毫升丙酮和50毫升1-丁醇加入一个深色玻璃瓶中。向瓶中加入3.5克茚三酮拌匀。

供应用

  • 无菌木棒或接种环
  • 孵化器在35°C
  • 试管
  • 蒸馏水

海蒲酸盐水解试验程序

A.海马酸溶液的制备

  • 在商业购买的脱水海马酸盐的情况下,0.2毫升(3或4滴)蒸馏水的pH值为6.8至7.2添加到测试试剂。
  • 将两滴蒸馏水加到空管中进行磁盘或片剂测试。
  • 对于实验室配制的海马酸溶液,每次试验向试管中加入0.4 ml试剂。

b .水解试验

  • 在管中,一个重悬架(相当于没有。3 McFarland标准),18- 24小时培养。取菌落时要小心,不要沾到含有蛋白质的琼脂。
  • 然后在35°C至37°C孵育2小时。
  • 孵育2小时后,在海马酸试剂-生物混合物中加入2滴茚三酮溶液。如果试验中含有0.4毫升或更多的海马酸,则需要额外滴2滴。
  • 然后试管在35 - 37°C下再孵育30分钟。
  • 每隔10分钟对试管进行观察,以观察其深蓝色的外观。通常在加入茚三酮指示液后10 - 15分钟内会出现颜色变化。

结果希蒲酸盐水解试验结果解释

结果希蒲酸盐水解试验结果解释

  • 海马酸盐水解反应阳性表现为在30分钟内呈现深蓝色(近似结晶紫的颜色)。
  • 阴性反应表现为外观呈淡紫色或无颜色变化。

控制生物

  • 链球菌agalactiae: hippurate积极。
  • 酿脓链球菌:hippurate负面的。

报告结果

  • l . monocytogenes微生物是微小的革兰氏阳性杆状细胞,它是过氧化氢酶阳性,在25°C下活动,-溶血,阳性,和海马阳性。
  • 美国agalactiae微生物为过氧化氢酶阴性,革兰氏阳性球菌,其特征是具有狭窄的-溶血区和海马酸阳性。
  • c .空肠微生物是弯曲的,革兰氏阴性杆状体,通过具有阳性的氧化酶和过氧化氢酶反应来识别,在35°C的有氧条件下没有生长,并且是河马酸阳性。
  • g .鞘突微生物为过氧化氢酶阴性,革兰氏变杆状菌,在人血琼脂上溶血,并为海马酸阳性。

海蒲酸盐水解试验的用途

  • 海马酸水解试验是用来区分属的物种链球菌因为B群链球菌可与A、C、F、G群链球菌区分开来,这些链球菌不能水解马尿酸钠。
  • 本试验还检测了水解底物马尿酸的马尿酸酶的产量。
  • 细菌水解Hippurate也被用于推定鉴定阴道加德纳菌空肠弯曲菌单核细胞增多性李斯特氏菌。

海蒲酸盐水解试验的局限性

  • 并不是所有的美国agalactiae生物体是溶血性的,一些绿色菌群链球菌可呈海马状阳性;因此,必须对非溶血性菌落进行另一项检测以确认其身份。
  • 少量肠球菌是-溶血和可水解马尿酸,但它们是吡咯烷醇-β-萘胺(PYR)阳性。
  • 一小部分c .空肠生物体是海马体阴性,必须通过其他方法鉴定。
  • 阴性检测也不能排除g .鞘突,因为导致细菌性阴道病的生物类型可能是河马阴性。
  • 如果与茚三酮孵育超过30分钟,就会出现假阳性结果。
  • 在4°C条件下,海马酸试剂在约7天内会变质。
  • 低接种量接种可能导致假阴性结果。
  • 该检测不应作为确认性检测,必须进行其他免疫学、分子或质谱检测来准确识别生物体。

引用和来源

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