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霍普金的科尔测试定义
霍普金柯尔试验是一种专门用于检测吲哚环和蛋白质中的色氨酸。由于试剂中含有乙醛酸,因此该检测也称为“乙醛酸检测”。1901年,弗雷德里克·高兰·霍普金斯(Frederick Gowland Hopkins)和西德尼·w·科尔(Sydney W. Cole)在发现色氨酸的工作中发现了这种检测方法。霍普金的科尔测试和亚当凯维斯反应非常相似,亚当凯维斯反应在原理上和这个测试很相似。霍普金的科尔测试受到了罗森海姆的批评,他认为测试中使用的乙醛酸在高温下很容易分解成甲醛和二氧化碳。罗森海姆发现了用甲醛来检测色氨酸。霍普金科尔试验是一种颜色反应,用于检测特定的氨基酸或蛋白质的基础上形成的特定颜色。该测试检测色氨酸氨基酸中的吲哚环,这反过来有助于识别含有色氨酸的蛋白质。
霍普金柯尔测验的目的
- 检测蛋白质中含有氨基酸的吲哚环的存在。
- 检测含有色氨酸的蛋白质的存在
霍普金柯尔测验原理
该测试的原理是,在含有色氨酸的蛋白质和霍普金的科尔试剂的混合物上分层浓硫酸,会在界面上形成一个紫色环。添加到样品中的乙醛酸通过作用于色氨酸分子的吲哚环使两个色氨酸分子结合。这样形成的缩合产物经过脱水形成一种紫色颜料。色氨酸分子的吲哚基团,被乙醛酸的醛基团氧化而转变成有颜色的化合物。H2所以4加入试剂有助于稳定乙醛酸,防止其分解和二氧化碳的释放。
反应
色氨酸+乙醛酸→缩合产物+ H2O→紫色化合物+ H2O
需求
试剂
- 霍普金的科尔试剂:乙醛酸-它可以通过将冰乙酸暴露在阳光下几天制备。
- 集中H2所以4
- 示例:0.1%氨基酸溶液
所需的材料
- 试管
- 试管架
- 吸量管
霍普金柯尔试验程序
- 在试管中取2ml暴露在阳光下的冰醋酸和2ml样品液。
- 这里是H2所以4在倾斜的位置上沿试管两侧添加。在不混合的情况下,将形成两层不同的液体。
- 应观察试管在两层界面处形成彩色环。
霍普金柯尔试验结果与解释
- 积极的结果:在两层交接处形成一个紫色的环表示为阳性结果。这表明含有色氨酸的蛋白质存在。
- 负面结果:阴性结果是在试管中没有紫色的环。这表明缺乏含色氨酸的蛋白质。
霍普金柯尔测试的应用
- 该测试用于检测样品中的蛋白质和氨基酸。
- 该测试是一种简单且易于操作的测试,有助于从其他氨基酸中识别色氨酸。
限制
- 像亚硝酸盐、氯酸盐、硝酸盐和过量的氯化物这样的化合物会阻止缩合产物的形成。
参考文献
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- 一些生化试验的研究。第二名:亚当凯维奇蛋白反应。色氨酸的霍普金斯-科尔试验机制。一种新的乙醛酸显色试验方法。生物化学杂志14、5(1920):548 - 64。doi:10.1042 / bj0140548
为什么我们把H2SO4加到试管壁上,而不是直接加到溶液中??