免疫电泳原理，程序，结果和应用，优点和局限性

• 免疫电泳是指降水在琼脂中电场作用。
• 它是免疫扩散和电泳相结合的过程。
• 抗原混合物首先通过电泳分离成其组成部分，然后通过双重免疫扩散进行测试。
• 抗原置于凝胶中切割的孔（没有抗体）并电泳。然后将槽切割成凝胶中放置抗体。
• 抗体横向扩散以满足扩散抗原，并且发生晶格形成和沉淀，允许确定抗原的性质。
• “免疫电泳”一词是格拉巴尔和威廉姆斯在1953年首次提出的。

免疫电泳原理

当电流作用于凝胶层状载玻片时，置于井中的抗原混合物根据其电荷和大小被分离成单个抗原组分。电泳后，分离的抗原与特定的抗血清反应，并将其置于平行于电泳迁移和扩散的槽中。谷中的抗血清向抗原组分移动，导致在18-24小时内形成单独的沉淀素线，每条线都表明单个蛋白与其抗体之间的反应。

免疫电泳程序

1. 将琼脂糖凝胶置于水平位置的载玻片上。
2. 使用示例模板，井上仔细地在应用区域上承担。
3. 用蛋白质稀释剂溶液（20μL抗原溶液+10μL稀释剂）稀释样品2：3。
4. 使用5 μl移液管，在每个对应的狭缝(控制狭缝和样品狭缝)上加5 μl对照和样品。
5. 将凝胶用阴极侧的样品置于电泳室中，电泳运行20分钟/ 100伏。
6. 在电泳完成后，将20μl相应的抗血清加入潮湿室中的槽中，并在室温下在水平位置温育18-20小时。
7. 将琼脂糖凝胶置于水平位置并用滤板片干燥。
8. 盐水溶液中的凝胶浸泡10分钟，再次干燥和洗涤两次。
9. 凝胶在低于70°C的温度下干燥，用蛋白染色液染色约3分钟，然后在脱色液浴中脱色5分钟。
10. 凝胶干燥并评估结果。

免疫电泳的结果

1. 椭圆形沉淀蛋白弧的存在代表抗原 - 抗体相互作用。
2. 没有形成沉淀物表明没有反应。
3. 根据沉淀线的强度、形状和位置，可以识别不同的抗原(蛋白质)。

免疫电泳的应用

1. 该试验有助于血清中存在的各种蛋白质的鉴定和近似量化。免疫电泳在蛋白质鉴定和免疫学中产生了突破。
2. 免疫电泳用于疑似单克隆和多克隆术语的患者。
3. 该方法可用于检测人血清中正常和异常蛋白，如骨髓瘤蛋白。
4. 用于分析含有不同抗原的复杂蛋白质混合物。
5. 医学诊断用途是值，其中某些蛋白质被怀疑不存在（例如，低氧紊乱血症）或过度赋予的（例如，多发性骨髓瘤）。
6. 这种方法对监测抗原和抗原-抗体纯度以及在抗原混合物中鉴定单一抗原是有用的。
7. 免疫电泳是血清和尿液中M-蛋白的定性分析的较老方法。
8. 免疫电泳有助于诊断和评价影响免疫系统的许多疾病状态的治疗反应。

免疫电泳的优点

1. 免疫电泳是一种强大的分析技术，具有高分辨率的功率，因为​​它结合了抗原的分离通过电泳与免疫分配对抗抗血清。
2. 免疫电泳的主要优点是可以在血清中鉴定出许多抗原。

免疫电泳的局限性

1. 免疫电泳比免疫电泳更慢，更敏感，更难以解释。
2. IEP不能检测到一些小的单克隆m蛋白，因为在最高浓度中存在的迁移最快的免疫球蛋白可能会掩盖小的m蛋白的存在。
3. 免疫电泳在食品分析中的应用受到特定抗体可用性的限制。

参考

1. 惠兰,Lydyard点。。,分子量和口腔外科医生(2005)．免疫学(2版)。伦敦:BIOS科学出版社。
2. Parija S.C.（2012）。微生物学与免疫学教科书。（2 ED。）。印度：印度elessvier。
3. http://www.hellabio.com/E89B86BA.en.aspx
4. 演员,J.K.(2014)。评估免疫参数和免疫诊断．介绍性免疫学。第135-152页
5. sstry A.S. & Bhat S.K.(2016)。医学微生物学基础。新德里:Jaypee Brothers医学出版社。

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