免疫荧光-定义，类型，步骤，用途

什么是免疫荧光?

免疫荧光是一种主要用于生物样本的检测方法，通常被定义为在细胞环境中使用抗体检测抗原的一种方法。抗体对其抗原的特异性是免疫荧光的基础。

某些染料吸收某一特定波长的光线(紫外线)，并以不同波长(可见光)发出它们的特性被称为荧光。在免疫荧光试验，一种在紫外线照射下发光的荧光染料，用来检测/显示抗原和抗体的特异性结合。通常使用的染料是异硫氰酸荧光素，它能发出黄绿色的荧光。免疫荧光试验也称为荧光抗体试验(脂肪)。

荧光素异硫氰酸盐和丽沙明罗丹明等荧光染料可被抗体分子标记。在荧光显微镜下，它们分别发出蓝绿色和橙红色的荧光。这构成了免疫试验的基础。免疫荧光检测在研究和诊断中有着广泛的应用。这些测试大致有两种类型:

1. 直接免疫荧光试验
2. 间接免疫荧光试验

直接免疫荧光试验

一个直接免疫荧光试验是利用已知的标记抗体，直接与未知抗原相互作用，检测细胞或组织中的未知抗原。如果存在抗原，它与标记的抗体发生反应，并在荧光紫外线下观察抗体包被的抗原。它涉及到标记抗病毒抗体的使用．

方法

标本放在幻灯片;使然后将抗体加入其中，等待一段时间进行抗原抗体反应。然后清洗该制剂，将允许除去除抗原和荧光标记抗体的复合物。在显微镜(荧光显微镜)上，可以观察到抗原-抗体复合物由于附着在抗原上的染料而发出荧光抗体

的需要制备单独标记的抗体对于每种病原体来说，直接免疫荧光检测的主要缺点是。

间接免疫荧光试验

间接荧光是一种双抗体技术。与抗原结合的未标记抗体通过指向未标记抗体的荧光抗球蛋白试剂可见。间接免疫荧光试验用于在血清和其他体液中检测特定抗体以进行血清学诊断很多传染病

方法

间接免疫荧光是一个两阶段的过程。

第一阶段:已知抗原固定在载玻片上。然后将患者待测血清涂在载玻片上，然后仔细清洗。如果病人的血清中含有对抗抗原的抗体，它就会与载玻片上的抗原结合。

第二阶段:在人IgG中加入荧光染料标记的抗体，在荧光显微镜下观察抗体与抗原的结合。

间接免疫荧光试验的第一步是将固定抗原(例如，在细胞或组织中)与免疫荧光试剂孵育未标记的抗体，它与抗原相关。仔细清洗后，将荧光抗体(如荧光标记抗igg)添加到涂片中。第二种抗体将与第一种抗体，即抗原抗体相结合在荧光显微镜上可以看到络合物。

间接法的优点是使用单一标记的抗球蛋白(IgG抗体)作为“通用试剂”来检测许多不同的特异性抗原-抗体反应。该检测通常比直接免疫荧光检测更敏感。

间接免疫荧光检测广泛应用于:

1. 检测用于梅毒、钩端螺旋体病、阿米巴虫病、弓形虫病和许多其他传染病血清学诊断的特异性抗体;
2. 通过使用针对不同免疫球蛋白同型的荧光抗体来确定给定抗体的类别;
3. 用单克隆抗体和细胞荧光图鉴定和列举淋巴细胞亚群;而且
4. 检测自身抗体，如自身免疫性疾病中的抗核抗体。

免疫荧光还可用于分析蛋白质、聚糖以及小生物和非生物分子的分布。免疫荧光技术已广泛应用于生物研究和医学研究中。

免疫荧光的主要限制是该技术需要

1. 昂贵的荧光显微镜和试剂，
2. 受过训练的人员
3. 是否存在可能导致错误结果的主观性因素

生物样本包括组织和细胞。免疫荧光有助于评估特定样本中的细胞是否表达研究中的抗原。在免疫阳性信号被发现的情况下，免疫荧光也有助于确定哪些亚细胞间室表达抗原。免疫荧光可用于培养的细胞系、组织切片或单个细胞。