免疫学技术。类型和例子

大多数免疫学技术都是基于抗原抗体反应。沉淀反应是抗原与抗体接触时发生的重要反应之一。当可溶性抗原与其抗体在最佳温度和pH的NaCl存在下发生反应时,抗原-抗体复合物形成不溶性沉淀。一般来说,液体介质和凝胶如琼脂、琼脂糖和聚丙烯酰胺用于这种反应。

免疫技术
免疫技术

免疫扩散试验

这是一种免疫学技术,用于在临床样本中找出不同的抗原和抗体。试验在1%琼脂中进行。在临床机构中使用免疫扩散试验有一些优点,例如:

  1. 反应后形成的条带清晰可见,稳定,可染色保存。
  2. 可以用不同的抗原来观察反应。由于每个抗原-抗体反应给出了一个特定的沉淀线,因此,它有助于识别特定的抗原。
  3. 可以观察到相同抗原、部分相同抗原和非相同抗原。

一维单扩散(Oudin过程)

  • 抗体在试管中与琼脂混合,并在其上加入抗原溶液。
  • 结果,抗原通过琼脂凝胶向下扩散,形成沉淀线。
  • 不同沉淀带的数量将表明不同类型的抗原。

一维双扩散(Oakley- Fulthrope法)

  • 抗体与琼脂在试管中混合。
  • 将一柱普通琼脂加在抗体溶液的顶部。
  • 将抗原倒在普通琼脂柱上。
  • 抗原和抗体通过中间的普通琼脂柱相互移动,当抗原和抗体达到最佳浓度时,形成沉淀带。

二维单扩散(径向免疫扩散)

  • 将抗体与琼脂凝胶混合,并在玻片上形成一层这种混合物。
  • 在凝胶表面切割小孔。
  • 抗原溶液将被加入孔中。因此,它扩散和形成一个环形的降水带。
  • 条带的直径与抗原的浓度成正比。
  • 该技术用于血清中IgG、IgM、IgA的测定和流感病毒抗体的筛选。

二维双扩散(Ouchterlony过程)

  • 在培养皿上形成一层琼脂凝胶。然后使用该模板形成井。
  • 在中心孔中加入抗体溶液,在周围孔中加入不同的抗原。
  • 如果两个相邻的抗原是相同的,沉淀线就会融合。
  • 如果两个相邻的抗原不相关,沉淀线就会交叉。
  • 在部分相关抗原的情况下,将观察到马刺的形成。
  • 该技术用于白喉杆菌的毒性试验(Elck试验)。

免疫电泳

  • 免疫电泳是电泳和免疫扩散的结合。
  • 使用半固态琼脂分层的玻璃载玻片。
  • 在琼脂表面形成一个孔,将抗原溶液加入孔中。
  • 电泳1小时。
  • 然后在平行于抗原迁移方向的地方切一个长方形的槽。将抗体溶液加入槽中,放置18-24小时以扩散。
  • 因此,将根据每个分离的化合物形成沉淀带。
  • 该技术可用于人血清中不同抗原及骨髓瘤蛋白等正常和异常血清蛋白的检测。

计数器免疫电泳

  • 这是一种一维双电免疫扩散试验。
  • 这种测试是基于抗原和抗体在相反方向的运动。
  • 该测试也在玻片上进行,玻片上将琼脂分层。
  • 琼脂表面会形成两个不同的孔。在一个孔中加入抗原,在另一个孔中加入抗体。
  • 电流会通过它加速抗原和抗体的相互运动。
  • 在两口井之间的某一点会形成一条降水线。
  • 这项测试是一项敏感的标准技术,需要大约30分钟来完成。
  • 该技术用于脑脊液中乙型肝炎抗原和隐球菌抗原的临床检测。

火箭电泳

  • 这是一种一维单次电免疫扩散试验。
  • 主要用于抗原的定量分析。
  • 在这种情况下,抗体与琼脂糖凝胶混合,这种混合物将用于在玻片上形成一层。
  • 凝胶表面会形成孔,抗原会以越来越高的浓度加入这些孔中。
  • 将进行电泳。
  • 因此,将观察到锥状降水带(火箭状结构)。
  • 火箭状结构的长度与抗原的浓度直接相关。

放射免疫检定法(RIA)

  • Berson和Yallow首先描述了这种技术。
  • 主要用于激素、药物、乙肝表面抗原、IgE、病毒抗原的定量。
  • 该测试是基于一个已知的放射性标记抗原和一个未知的测试抗原之间对一个固定数量的特定抗体的竞争。
  • 竞争是由反应系统中检测抗原的水平决定的。
  • 在抗原-抗体反应结束时,将发现游离和结合部分的抗原,并将测量其放射性。
  • 试验抗原的浓度是根据结合抗原水平和总抗原水平的比值用参考曲线计算出来的。

酶联免疫吸附试验(ELISA)

ELISA是一种简单而敏感的检测方法,用于检测不同的抗体和抗原。它只需要微升量的测试试剂。酶联免疫吸附法的原理是一种酶作用于特定的底物而产生颜色。颜色将表示阳性结果。基于这一原理,有不同类型的ELISA,如

夹心ELISA

  • 微量滴定板用于进行这项试验。所述板孔涂有针对待测抗原的特异性抗体。
  • 然后将临床标本添加到孔中。
  • 如果抗原存在于标本中,它就会与包被抗体结合。
  • 这种抗原抗体反应是通过与酶结合的抗血清来检测的。
  • 这种抗体附着在已经与其特异性抗体结合的抗原上。
  • 然后向反应混合物中加入底物,该反应混合物将与共轭酶结合。
  • 如果结果为阳性,酶-底物复合物将产生颜色,然后由ELISA阅读器进一步读取颜色的强度。
  • 阳性和阴性对照应随检测一起进行。

间接ELISA

  • 这项试验是用来检测抗体的。
  • 微量滴定板的孔上涂有抗原。
  • 将临床样本或血清添加到这些孔中。
  • 如果特异性抗体存在于样品中,它将与包被在孔中的抗原形成复合物。
  • 这种抗原抗体复合物通过添加酶结合的抗人免疫球蛋白来检测,它将与标本的抗体结合。
  • 然后加入一种底物,与酶形成复合物并产生颜色,作为阳性结果。
  • 阳性和阴性对照对执行该试验同样重要。
  • 常用的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。用于辣根过氧化物酶的底物为邻苯二胺-二盐酸盐,用于碱性磷酸酶的底物为对硝基苯磷酸盐。

竞争ELISA

  • 用于检测艾滋病毒抗体。
  • 与前两种不同。在这种情况下,颜色的出现表明测试是阴性的,而没有颜色变化表明结果是阳性的。
  • 在这种情况下,竞争发生在酶联抗体和临床样本中的测试抗体之间。这两种抗体争夺同一抗原。
  • 微量滴定板的孔上涂有HIV抗原。将血清(测试样本)加入这些孔中,在室温下孵育,然后洗涤。
  • 如果检测样品中存在特异性抗体,就会发生抗原抗体反应。
  • 然后将酶标记抗体添加到反应混合物中,以检测抗原-抗体复合物。培养皿在孵育后进一步清洗。
  • 如果检测样品含有HIV抗体,那么这些酶联抗体将无法与抗原形成复合物,洗涤后会离开反应混合物。
  • 然后,添加底物,由于系统中不存在酶联抗体,所以不会观察到颜色变化作为阳性检测。

利用ELISA

  1. 血清中HIV抗体的检测
  2. 分枝杆菌抗体检测。
  3. 检测轮状病毒在粪便。
  4. 血清中乙型肝炎标志物的检测。
  5. 的肠毒素检测大肠杆菌在粪便。

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