IMViC测试-原理,程序,结果,用途,局限性

IMViC是四种独立测试的首字母缩写,用于分离和识别细菌,特别是大肠菌群。IMViC代表:

  1. 吲哚试验
  2. 甲基红试验
  3. Voges-Proskauer测试
  4. 柠檬酸利用率测试

该检测用于鉴别和选择性鉴别Enterobacteriaceae家族成员。每种接种试验都有不同的肉汤,如吲哚试验的色氨酸肉汤,甲基红-弗格斯-普罗斯考尔肉汤(MR-VP肉汤),弗格斯-普罗斯考尔试验和甲基红试验,柠檬酸盐肉汤,柠檬酸盐试验。

IMViC测试
IMViC测试

IMViC测试的目的

  1. 区分肠杆菌科的成员,特别是大肠杆菌肠杆菌属而且克雷伯氏菌。
  2. 进行吲哚、甲基红、Voges-Proskauer和柠檬酸盐利用试验。

吲哚试验

吲哚试验原则

吲哚试验选择性地区分了将氨基酸色氨酸分解成吲哚的细菌类型,吲哚在培养基中积累并改变培养基的pH值。参与这一过程的酶被称为色氨酸酶。当吲哚与科瓦奇的试剂反应时,它会使肉汤的颜色从黄色变成樱桃红色。

由于红色中戊醇的不溶性,在肉汤的表面观察到一层油。

本实验一般采用硫化物-吲哚-运动(SIM)培养基、色氨酸肉汤或运动脲酶吲哚(MIU)培养基。加入Kovac试剂后进行观察。

这是鉴别肠道菌群的一项重要试验大肠杆菌,寻常型P. Vulgaris,雷氏P. rettgeri,摩根氏M.,Providencia物种。

吲哚试验所需的材料

  • 含有对二甲氨基苯甲醛的科瓦克试剂
  • SIM卡中
  • 37%的盐酸
  • 戊醇
  • 密封瓶
  • 蒸馏水

吲哚试验过程

  1. 取装有4毫升色氨酸肉汤的灭菌试管。
  2. 无菌接种试管,培养18至24小时。
  3. 试管在37°C孵育24-28小时。
  4. 向培养液中加入0.5 ml科瓦奇试剂。
  5. 观察是否有环。
吲哚试验

吲哚试验预期成果

  • 积极的:在添加试剂的几秒钟内,在培养基上的试剂层形成粉红色到红色的颜色(“樱桃红色的环”)。
    例子:大肠杆菌黄杆菌属sp。流感嗜血杆菌克雷伯氏菌oxytoca普罗透斯sp。(不p .奇异君子兰而且p . penneri),巴斯德菌pneumotropica粪肠球菌,弧菌sp。
  • :即使加入适当的试剂也不会变色。
    例子:放线杆菌spp。产碱杆菌属sp,最芽孢杆菌sp。博代氏杆菌属sp。肠杆菌属sp。乳酸菌spp。最嗜血杆菌sp,最克雷伯氏菌sp。奈瑟氏菌属sp。巴斯德菌haemolyticaPasteurellaureae

甲基红(MR)试验

测试先生原则

  • 利用混合酸途径,一些细菌可以将葡萄糖转化为乳酸、乙酸或甲酸等酸,以丙酮酸为中间体。因此,产生的酸将培养基的pH降低到4.5或以下,这可以通过pH指标检测,如甲基红,它将介质颜色从黄色转化为红色。
  • 该试验利用细菌的这种特性,首先将其培养在含葡萄糖的培养基上,然后将甲基红添加到含有这些细菌的肉汤培养物中。

测试先生媒体和试剂

  • MRVP肉汤(pH 6.9),去离子水,缓冲蛋白胨,葡萄糖和磷酸二钾。
  • 甲基红的解决方案

测试先生过程

  1. 接种前,使培养基平衡至室温。
  2. 使用取自18-24小时纯培养的微生物,轻轻接种培养基。
  3. 在37度下有氧孵育24小时。
  4. 24小时的孵育后,将1ml的肉汤倒入干净的试管中。
  5. 将剩下的肉汤再重新孵育24小时。
  6. 加入2 ~ 3滴甲基红指示剂到溶液中。
甲基红(MR)检测结果解释

MR测试预期结果

  • 积极的反应:鲜明的红色。
    例子:大肠杆菌、鼠疫sps等等。
  • 负面反应:一个黄色的颜色。
    例子:肠杆菌属aerogenes Klebsiellapneumoniae,等。

Voges-Proskauer (VP)测试

副总裁测试原理

Voges-Proskauer (VP)试验用于确定有机体是否从葡萄糖发酵产生乙酰甲基甲醇。如果存在,乙酰甲基甲醇会在-萘酚、强碱(40% KOH)和大气氧的存在下转化为双乙酰。

2丙酮酸=丙酮酸+ 2CO2
乙啶+ NADH + H+= 2,3-丁二醇+ NAD+

副总裁测试所需的材料

  • Voges-Proskauer试剂:巴里特试剂A, α -萘酚,5%,无水乙醇
  • Voges-Proskauer试剂B:巴瑞特试剂B,氢氧化钾,去离子水,试管,蒸馏水。

副总裁测试过程

  1. 接种前,使培养基平衡至室温。
  2. 使用取自18-24小时纯培养的微生物,轻轻接种培养基。
  3. 在37度下有氧孵育24小时。
  4. 24小时的孵育后,将2毫升肉汤分离到一个干净的试管中。将剩下的肉汤再重新孵育24小时。
  5. 加入6滴5%的α -萘酚,混合均匀以曝气。
  6. 加入2滴40%氢氧化钾,混合均匀以曝气。
  7. 30分钟内观察表面呈粉红色。30分钟内用力摇动试管。
VP测试结果解释

副总裁测试预期成果

  • 积极的反应:表面的粉红色。
    例子:翠绿色菌群链球菌(前庭链球菌除外)、李斯特菌、肠杆菌、克雷伯菌、沙雷氏菌、哈弗氏菌、eltor弧菌、溶藻弧菌、等。
  • 负面反应:缺少一种粉红色的颜色。
    例子:mitis链球菌,Citrobacter sp.,志贺氏菌,耶尔森菌,爱德华菌,沙门氏菌,furnissii弧菌,河流弧菌,创伤弧菌和副溶血性弧菌,等。

柠檬酸利用率测试

柠檬酸利用率测试原则

  • 有些细菌利用柠檬酸盐作为能量来源,借助一种酶——柠檬酸透酶,将柠檬酸盐转化为丙酮酸,丙酮酸通过代谢循环产生能量,在这个过程中,无机铵盐分解为氨,增加培养基的烷基度,从而使培养基为碱性,从而能够在含无机铵盐为氮源的柠檬酸盐琼脂上生长。
  • 溴百里酚蓝可作为pH指示剂,使介质颜色由绿色变为蓝色。

柠檬酸利用率测试媒体和需求

  • 西蒙氏柠檬酸盐琼脂含有氯化钠,柠檬酸钠,磷酸二氢铵,磷酸二钾,硫酸镁
  • 溴麝香草酚蓝
  • 琼脂

柠檬酸利用率测试过程

  1. 用从隔离良好的菌落中心挑出的轻接种物来来回回地在斜面上划线。
  2. 在35 - 37摄氏度的环境下进行有氧培养,最长可达4-7天。
  3. 沿着斜面观察从绿色到蓝色的颜色变化。
柠檬酸西蒙斯琼脂的结果解释

柠檬酸利用率测试预期成果

  • 积极的反应:沿斜面生长,颜色由绿色变为深蓝色。
    例子:沙门氏菌,爱德华氏菌,柠檬酸杆菌,克雷伯菌,肠杆菌,沙雷氏菌,普罗维登西亚菌等。
  • 负面反应:不生长,不变色;偏是绿色的。
    例子:埃希氏菌,志贺氏菌,摩根氏菌,耶尔森菌等。

IMViC测试的使用

  1. 当与脲酶试验一起使用时,IMViC足以区分肠杆菌科。
  2. 特别是用于大肠杆菌、产气肠杆菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌。
  3. 可用于测定细菌的活性和二硫化物的产生。

IMViC测试的局限性

  1. 吲哚试验不能用已经含有染料的培养基进行,如麦康基琼脂
  2. 有些细菌虽然在柠檬酸琼脂上生长,但颜色没有变化,但仍然被认为是柠檬酸利用的积极细菌。
  3. 结果不明确的试验应重复进行
  4. 仅用柠檬酸琼脂的反应不足以将这些物种归类为柠檬酸利用的阳性物种。

参考文献

  1. https://universe84a.com/collection/imvic-test/
  2. https://solutionpharmacy.in/biochemical-test-imvic/
  3. https://microbeonline.com/imvic-tests-principle-procedure-and-results/
  4. https://microbiologyinfo.com/indole-test-principle-reagents-procedure-result-interpretation-and-limitations/
  5. https://www.labtestsguide.com/imvic-tests
  6. https://patents.google.com/patent/US4187351A/en
  7. https://gpatindia.com/imvic-tests-principle-procedure-and-results-notes-for-microbiology-exam/
  8. //www.kirikcitarim.com/indole-test-objective-principle-media-procedure-and-results/

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