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isatin测试定义
Isatin测试是检测的生化测试氨基酸像脯氨酸和羟脯氨酸一样。该试验是针对特定氨基酸的特异性测试，其用Isatin试剂产生着色的添加产物（也称为加合物）。随着茚三酮试验等方法可以仅在与其它氨基酸分离后仅检测脯氨酸的方法，亚氨基酸脯氨酸的检测不令人满意。1971年后，Fouad N. Boctor提出了脯氨酸和Isatin之间的反应，可用于定性和定量地确定脯氨酸的量。由于isatin与两种化合物反应以产生着色产品，因此不能通过该试验进行脯氨酸和羟脯氨酸之间的区别。
Isatin测试的目标
- 检测样品中脯氨酸和含羟基脯氨酸蛋白质的存在。
- 将脯氨酸和羟脯氨酸与其他氨基酸区分开来。
Isatin测试原理
测试中使用的Isatin试剂作为可视化剂，其在色谱技术中提供不同颜色的不同颜色。脯氨酸和羟脯氨酸之间的Isatin反应产生特征的蓝色产品。丙氨酸和羟脯氨酸等亚氨基酸之间的反应产生蓝色加合物。反应是一种简单的添加反应，其中isatin和脯氨酸的组合产生着色产品，表明存在亚氨基酸。
要求
试剂
- Isatin试剂：通过将0.5M柠檬酸钠缓冲液溶解在3至11的pH值范围内，通过将0.02％的isatin溶液制备。
- 样本
- 浓缩HCL
需要材料
- Whatman No. 1滤纸
- 热空气烤箱
- 移液器
Isatin测试程序
- 将一滴样品（氨基酸）溶液加入到A的Whatman No.1滤纸中，并通过将其放入热空气烘箱中而干燥。
- 现在，将一滴的异素试剂加入干燥的斑点中，重复在热空气烘箱中干燥的过程。
- 然后观察到纸张形成蓝色斑点。
Isatin测试的结果和解释
- 肯定结果：istain试验的阳性结果是通过在滤纸上形成蓝色斑点来表示。这表明存在亚氨基酸。
- 否定结果：Isatin测试的阴性结果是通过在滤纸上形成粉红色的斑点。这表明没有亚氨基酸。
使用Isatin测试
- 该试验用于检测样品溶液中的脯氨酸和羟基脯氨酸氨基酸。
- Isatin测试是检测污染空气中多核烃和酚的标准试验之一。
- 该方法简单，快速，适用于较大样品中的脯氨酸含量。
限制
- 应仔细观察测试中观察到的颜色，如果观察到混合颜色，则应重复测试。
参考
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