表的内容
- 苏云金杆菌(Bt)是一种普遍存在的革兰氏阳性和产孢细菌，在产孢过程(Cry和Cyt)和营养生长过程(Vip和Sip)中合成针对广泛昆虫的特异性杀虫蛋白。
- 这些蛋白质将Bt描述为化学杀虫剂的环保替代品。
隔离原理苏云金杆菌
广泛使用的方法从土壤分离Bt包括热休克处理，然后选择孢子萌发。用热冲击去除样品土壤中所有不能产生内生孢子的细菌。然后将样品稀释许多倍，以消除土壤中的腐殖质，并减少样品中菌落的整体形成单位。将稀释后的样品置于营养琼脂上培养，使孢子在营养充足和温度适宜的培养基上萌发。培养基为多种细菌提供了有利的生长条件，包括苏云金杆菌．因此，进一步采用了一系列选择试验来确定苏云金杆菌仅从粗土壤样本中存在的细菌范围来看。常用的重要试验有乙酸钠选择试验、革兰氏染色法、氨基黑和泽尔卡波品红染色法、内生孢子染色法、过氧化氢酶试验、45以上生长检查oC并寻找伴胞体的存在。
隔离程序苏云金杆菌
- 在去除表层2-3厘米后，用管状土壤取样器获取约20克的栽培或非栽培土壤样品。
- 将样品置于4ºC 50毫升(无菌)离心管或自封袋中，直至分离。
- 将1g土壤样品悬浮在10ml 0.85% NaCl中。
- 70°C摇晃加热10分钟。
- 在营养琼脂(0.5%蛋白胨，0.3%牛肉提取物，0.5% NaCl和1.5%琼脂)上取100μl悬液。
- 30±2°C孵育板48h。
- 在新鲜平板上再次培养显示bt样表型的继代菌落进行单菌落分离并培养。
- 用氨基黑和齐氏碳品红对培养物进行染色，在标准光学显微镜下进行初步鉴定。
预期隔离结果苏云金杆菌
- 菌落大多呈哑光白色，扁平，干燥，边界不均匀。
- 培养物在显微镜下观察到染色为黑色的副孢晶体是很重要的，需要储存。
参考
- (PDF)苏云金芽孢杆菌的分离鉴定及其对淡色库蚊幼虫的影响。可以从:https://www.researchgate.net/publication/299845038_Isolation_and_Characterization_of_Bacillus_thuringiensis_Isolated_from_Soil_and_their_Possible_Impact_on_Culex_pipiens_Larvae[updated]。
- Travers r.s.， Martin P.A.和Reicheferfer C.F. 1987。土壤芽孢杆菌的高效分离，环境科学与技术。53,1263-1266。
- http://biopublisher.ca/index.php/bt/article/html/2019/
- https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167701208002352
- https://aem.asm.org/content/aem/53/6/1263.full.pdf
- https://core.ac.uk/download/pdf/39664802.pdf