表的内容
客观的
以葡萄糖和乳糖的发酵和硫化氢的产生为基础对肠道革兰氏阴性杆菌进行鉴别。
原则克利格勒铁琼脂试验
Kligler铁琼脂(KIA)测试用于鉴别肠杆菌科的某些成员，通过显示硫化氢的产生以及葡萄糖和乳糖的发酵。用于测试的克利格勒琼脂包括酪蛋白和肉蛋白胨，提供细菌生长所需的含氮化合物、氨基酸和维生素。媒介包括两个来源碳水化合物葡萄糖和乳糖，还含有酚红作为碳水化合物发酵的指示剂。两种糖的使用有助于区分有机体的基础上只发酵葡萄糖和那些也发酵乳糖。然而，培养基中葡萄糖的浓度是乳糖浓度的十分之一。
由于葡萄糖发酵，非乳糖发酵罐最初产生黄色斜面和臀部。葡萄糖的浓度只有百分之一，因此很快就会耗尽。一旦葡萄糖在培养基中耗尽，反应就会恢复到碱性条件，表现为酸的氧化导致的红色倾斜。在保持酸性环境(黄色对接)的介质对接中不发生还原。乳糖发酵生物产生黄色的斜面和烟蒂。由于在好氧条件下产生了足够的酸来维持酸性pH值，所以斜面中不会还原为红色。非发酵罐产生红色斜面和烟蒂。H2S的产生会导致介质发黑，要么是整个屁股，要么是在屁股顶部附近形成一个环。产气表现为介质中气泡或裂缝的存在。
媒体使用
Kligler铁琼脂
| 蛋白胨 | 15.0通用 |
| 眎蛋白胨 | 5.0通用 |
| 乳糖 | 10.0通用 |
| 葡萄糖 | 1.0通用 |
| 牛肉膏 | 3.0通用 |
| 酵母提取物 | 3.0通用 |
| 氯化钠 | 5.0通用 |
| 硫代硫酸钠 | 0.3通用 |
| 硫酸亚铁 | 0.2通用 |
| 酚红 | 0.024通用 |
| 琼脂 | 12.0通用 |
25ºC时，最终pH 7.4 +/- 0.2。
过程克利格勒铁琼脂试验
- 用直针接种，从培养基中心刺穿到管底，然后在抽针的同时在斜线上划线接种KIA。
- 将试管在35-37ºC下用松帽有氧孵育18-24小时，并观察培养基的反应。
结果克利格勒铁琼脂试验
图片来源:哈代诊断
碳水化合物发酵
- 适用于斜面和臀部
- 积极的测试:黄色(酸)
- 负面测试:红色(碱性)
- 的屁股
- 积极的测试:黄色的
- 负面测试:红色的
红/黄偏对接:葡萄糖阳性，乳糖阴性
黄色/偏黄色对接:葡萄糖阳性，乳糖阳性
红色偏/红屁股:葡萄糖阴性，乳糖阴性
硫化氢生产:
- 积极的测试:在整个介质中或在斜面和屁股之间的连接处有黑色沉淀或颜色
- 负面测试:无黑色显影
天然气生产
- 积极的测试:气泡:介质中气泡或裂缝的存在
- 负面测试:无气泡:介质中没有气泡或裂缝
限制克利格勒铁琼脂试验
- 培养基不含任何抑制剂，所以许多生物体类型可以生长。
- 在18-24小时内阅读并解释结果。在<18小时读取的反应可能会被错误地解释，因为发酵的碳水化合物可能没有产生足够的酸来改变酚红指示器。由于蛋白胨的使用，24小时读取的反应可能会被错误地解释，这将导致碱性pH值的变化。
- 烟蒂中产生的H2S可能会掩盖产生的酸性。
- H2S指标在KIA中的敏感性较低，因此一些H2S阳性的革兰氏阴性杆菌可能在KIA中不产生H2S。
- 在孵卵过程中，试管必须松散地盖住，因为在盖紧的试管中，葡萄糖发酵引起的酸反应也会涉及倾斜。
质量控制
大肠杆菌ATCC 25922-黄色斜面/黄色屁股，H2S(-)，气体(+)
铜绿假单胞菌ATCC 27853-红斜/红屁股，H2S(-)，气体(-)
沙门氏菌血清鼠伤寒ATCC 14028-红色斜体/黄色臀部，H2S(+)，气体(+)