黑甲酚棉蓝色（LPCB）染色

棉酚棉蓝色（LPCB）染色是一种用于微观检查和鉴定真菌的简单组织学染色方法。

棉花棉花蓝（LPCB）染色原理

乳酚棉蓝(LPCB)染色法的工作原理是协助鉴定真菌细胞壁。

• 真菌是具有宏观和微观特征的真核生物。
• 真菌孢子细胞壁由甲壳素组成，其中棉酚棉蓝溶液污渍的组分用于鉴定。
• 甜菜酚棉蓝色溶液用作安装溶液以及染色剂。
• 解决方案是透明和蓝色的颜色，它由三种主要试剂的组合组成：
  • 苯酚：它通过杀死任何生物体来充当消毒剂
  • 乳酸：保留真菌结构
  • 棉蓝色：染色或给真菌细胞壁和其他真菌结构染色甲壳素
• 污渍将使真菌的真菌孢子和结构等蓝色外观，例如菌丝。

乳酚棉蓝染色试剂

制备50ml甜菜酚棉蓝色染色溶液：

• 蒸馏水50毫升
• 棉蓝色（苯胺蓝色）0.125g
• 苯酚晶体（C_6.H_5.O._4.） 50克
• 甘油100ml.
• 乳酸（CH_3.CHOH羧基)50毫升
• 70%的乙醇

注意：在使用前至少2天准备加乳丁醇棉蓝色溶液。

乳酚棉蓝溶液的制备

加乳丁醇棉蓝色溶液制备超过两天，使试剂不受干扰以允许溶解和成熟。

1. 第1天：将棉蓝色溶解在蒸馏水中，并在一夜之间休息。这消除了不溶性染料。
2. 第2天:戴上防护手套，将苯酚晶体加入玻璃烧杯中的乳酸中，用磁力搅拌器搅拌直到晶体溶解。
3. 加入甘油
4. 将棉蓝色和蒸馏水过滤到酚+甘油+乳酸溶液中并混合。
5. 在室温下储存。

内乳蛋白棉蓝色（LPCB）染色的程序

1. 在清洁的微观玻璃载玻片上，添加70％乙醇
2. 根据使用样品，将真菌样品加入到醇的滴落中，例如接种环（来自固体介质）。
3. 用装针器梳理酒精中的真菌样本，以确保样本与酒精混合良好。
4. 使用滴管或移液管，在乙醇干燥之前加入一两滴一滴内乳蛋白棉蓝色溶液（上面制备）。
5. 小心地用干净的无菌盖子盖住污渍，不要使污渍起泡。
6. 在40倍下进行显微镜检查污渍，观察真菌孢子和其他真菌结构。

结果和解释

真菌孢子，菌丝和结果结构染色蓝色，而背景污渍淡蓝色。

例如,

• Aspergillus尼日尔染色菌丝和结果结构一片精致的蓝色，淡蓝色背景。
• richophyton.术指示者还污染了菌丝和结果结构是一种淡蓝色背景的精美蓝色。

图：首先：scopulariopsis.棉花蓝色污渍上的物种。图像来源：stylish_streaking.和Senthil Prabhu.。

限制

• 它只能作为真菌的推定鉴定方法，随后应与其他诊断工具，如生化和培养检查。
• 溶液的组成部分应在失效前使用，包括在失效前使用。
• 该解决方案可能会破坏真菌的原始形态。
• 该染色只能用于鉴定成熟真菌及其结构，而不能鉴定真菌的年轻营养形态。
• 污渍不能长时间保存。

应用程序

• 用于鉴定疑似真菌样品。
• 真菌及其结构的一般鉴定。

参考资料和来源

1. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/LactophenolCottonBlStn.htm
2. http://www.himedialabs.com/td/s016.pdf.
3. https://en.wikipedia.org/wiki/lactophenol_cotton_blue.
4. 微生物在线/香肠胶卷
5. https://laboratoryinfo.com/lactophenol-cotton-blue-lpcb/
6. https://mycology.adelaide.edu.au/laboratory/lacto/
7. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/pmc1706009/