目录
- 当在合适的温度和pH下在电解质存在下与其抗体混合颗粒或不溶性抗原时,颗粒被块或凝集。
- 凝集反应分为直接凝集反应、间接(被动)凝集反应和反向被动凝集反应。
- 直接凝集试验指抗原与抗体直接凝集的试验。
- 间接或被动凝集涉及在载体分子(例如RBC,胶乳或膨润土)的表面上涂覆抗原,使得抗体与涂覆的抗原结合,并在载体分子的表面上进行凝集。它们也被称为“颗粒凝集试验”。
- 反向被动凝集试验是一种特殊类型的颗粒凝集试验,其中抗体涂覆在载体分子上,载体分子中检测患者血清中的抗原。
乳胶凝集试验
一群被动凝集将抗原或抗体涂在人造载体乳胶珠上的试验称为乳胶凝集试验。它们也可以被称为乳胶固定试验可能是:
抗体检测胶乳凝集试验(LAT):抗原结合乳胶珠(聚苯乙烯乳胶颗粒)表面的被动凝集试验直径0.8- 1 μm)。
乳胶凝集试验(LAT)用于抗原检测:乳胶珠表面抗体的反向被动凝集试验。
胶乳凝集试验目的
通过抗原 - 抗体的凝集反应检测微生物和病毒感染,自身免疫疾病,激素,药物或血清蛋白。
乳胶凝集试验原理
抗体或抗原分子可以与胶乳(聚苯乙烯)珠子表面的随机对准结合。与每个胶乳颗粒结合的抗体或抗原分子的数量大,导致大量暴露的潜在结合位点。样品中存在的抗原或抗体与暴露在胶乳珠粒表面上的相应抗原/抗体的组合位点结合,形成胶乳珠和抗原/抗体的交联聚集体。胶乳的大粒径有助于抗原抗体反应的可视化。
乳胶凝集试验的要求
1.5 ml小瓶,微离心机,吸管,微针尖,实验室冰箱,甘氨酸生理盐水缓冲液,阻断缓冲液,抗原涂层,乳胶珠,抗血清测试,玻片,烧杯,牙签。
胶乳凝集试验的程序
两种乳胶试验的常见步骤涉及涂层胶乳的微珠与病原体特异性抗原或抗体。患者的脑脊液,血清或尿液与涂覆的乳胶颗粒中的连续稀释液混合,具有生理盐水,并观察到凝集(块状)。
胶乳涂层(用于检测抗体)
- 在1.5ml小瓶中加入20μl胶乳珠,加入40μl甘氨酸 - 盐水缓冲液。
- 在乳胶中加入60 μl抗原,37℃孵育2小时。
- 以5000转/分向下旋转10分钟,小心吸出上清。
- 将颗粒重悬于1ml封闭缓冲液中,然后以5000rpm旋转10分钟。
- 再次重复洗涤。
- 将90μL阻塞缓冲液加入颗粒,混合良好。
- 4摄氏度孵育过夜。
凝集试验
- 取200 μl甘氨酸生理盐水缓冲液,加4 μl待测抗血清。(50倍稀释)。
- 取1.5 ml小瓶,在50 μl稀释抗血清中加入50 μl抗原,混合均匀,室温孵育10分钟。
- 取10 μl涂乳胶移液到玻片上。
- 在A玻片上加入10 μl稀释的抗血清。
- 将10μL与抗原混合的抗血清(从步骤1)加入B.
- 在C中加入10 μl甘氨酸生理盐水缓冲液。
- 拍摄牙齿挑选并将每个载玻片混合。在一个幻灯片中使用后丢弃牙齿拾取(为下一个幻灯片拍摄新的一个)。
- 混合后,等待2分钟以观察结果。
乳胶凝集试验的结果与解释
根据程序的不同,将一些反应报告为阳性或阴性,另外反应在1+至4升尺度上分级,2+通常在阳性样品中可见的最小凝集量,而不借助于显微镜。
积极的:在任何一种稀释剂中,凝集成块状的小珠被认为是阳性结果。
它可以确认病人的身体产生了病原体特异性抗体(如果检测提供了抗原),或者标本含有病原体的抗原(如果检测提供了抗体)。
消极的:没有凝集或形成块状。
缺乏病原体特异性抗原或抗体。
胶乳凝集试验的应用
- 乳胶试验是临床实验室常用的抗原检测方法Cryptococcus neoformans.在脑脊液或血清中。它还用于检测肺炎球菌的囊孔抗原,流感嗜血杆菌和脑膜炎球菌。
- 来证实乙型溶血病的存在链球菌来自培养板。
- 乳胶试验不断为各种生物开发,例如用于检测艰难梭状芽胞杆菌毒素A和B轮状病毒大肠杆菌0157:H7来自嫌疑殖民地大肠杆菌.
- 乳胶凝集试验采用乳胶颗粒包覆抗crp抗体,是目前世界上应用最广泛的检测c反应蛋白的方法。乳胶凝集试验CRP检出限为0.6 mg/dl。
- 用于抗体检测的乳胶凝集试验(LAT)用于检测ASO(AntistReptolysin O抗体)。
胶乳凝集试验的优点
- 胶乳珠的尺寸(0.8 μm或更大)增强了胶乳凝聚反应的可视性。
- LAT是目前最广泛使用的测试之一,因为它非常简单,快速。据信拟议了许多其他血清学试验,包括共凝集试验。
- 它们廉价,相对稳定,不受与其他抗体交叉反应性的。
- 通过乳胶凝集检测到的细菌多糖水平已被证明低至0.1 ng/mL。
乳胶凝集试验的局限性
- 由于溶液的pH值、渗透性和离子浓度会影响所发生的结合量,因此必须严格规范胶乳凝集过程的条件。
- 一些体液成分,如类风湿因子,已被发现在可用的乳胶凝集系统中引起假阳性反应。
- 一些凝集方法要求样品在测试前在56°C下加热或用乙二胺四乙酸(EDTA)进行预处理,使其成为一个繁琐的过程。
参考
- http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=69&sim=195&cnt=2
- https://en.wikipedia.org/wiki/Latex_fixation_test
- 歌手JM,Edberg Sc,Selinger M,Amram M(1979)。“乳胶固定试验的质量控制”。是。J. Clin。Pathol。72(4):591-6。
- 惠兰,Lydyard点。。,分子量和口腔外科医生(2005)。免疫学(2版)。伦敦:BIOS科学出版社。
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- sstry A.S. & Bhat S.K.(2016)。医学微生物学基础。新德里:Jaypee Brothers医学出版社。
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