卵磷脂酶试验.目的、原理、程序和结果

卵磷脂酶试验的目的

目的是确定微生物产生卵磷脂酶的能力，并鉴定能够产生卵磷脂酶的细菌。

卵磷脂酶试验原理

卵磷脂酶或磷脂酶是由细菌释放的酶，具有破坏动物组织的能力，并在致病性中发挥作用。卵磷脂酶，又称磷脂酶C，是一种分解磷脂卵磷脂的酶。磷脂复合物通常是发生在组织、血清和蛋黄中的乳化剂。卵磷脂是蛋黄的正常成分。用卵磷脂酶活性来表征几种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。在卵黄琼脂培养基上生长时，细菌卵磷脂酶将卵磷脂分解成不可溶的双甘油脂，在菌落周围形成不透明的晕圈。

蛋黄琼脂是一种基于卵磷脂酶和脂肪酶的产生以及蛋白水解活性的差异化和富集培养基，用于分离和推定不同物种的差异化。在蛋黄琼脂中，脂蛋白组分卵磷脂磷脂也可被卵磷脂酶分解为磷酰胆碱和不溶性甘油三酯，从而在培养基中形成沉淀物。这种沉淀物以白色光晕的形式出现，围绕着产生卵磷脂酶的菌落。乳白色的产生是由于游离脂肪的释放。

注:

蜡样芽孢杆菌好氧孢子产生菌是一种强卵磷脂酶阳性菌，可通过甘露醇卵黄多粘菌素（MYP）琼脂平板鉴定。B蜡样典型的甘露醇阴性，在MYP琼脂中产生粉红色的菌落，菌落周围有一个沉淀区，表明卵磷脂酶活性阳性。用于识别产气荚膜梭菌与其他梭状芽孢杆菌不同的是，使用了蛋黄琼脂。它是一种富集的、非选择性的、差异化的培养基，也用于Nagler试验中，用于对产气荚膜梭菌. 它以无氧还原状态包装，以防止有毒氧化副产物的形成，从而破坏专性厌氧菌并抑制更挑剔物种的生长。卵磷脂酶试验阳性的特征是出现白色、不透明、扩散区，扩散到菌落周围的培养基中。

卵磷脂酶试验用培养基

蛋黄琼脂培养基

酪蛋白胰腺消化	15.0克
维生素K1.	10.0克
氯化钠	5.0克
豆粕木瓜粉	5.0克
酵母抽提物	5.0克
L-胱氨酸	0.4通用
血红素	5.0毫克
蛋黄乳液	100.0毫升
琼脂	20.0通用

最终pH 7.0 +/- 0.3在25ºC。

卵磷脂酶试验程序

1. 取一圈测试生物体，在盘子上划出一条直线。
2. 划线后立即在gas-pak罐中进行厌氧培养，并转移至培养箱中，保持在35-37^oC厌氧菌和需氧菌在35-37℃下培养24-48小时^oC持续24-48小时。
3. 检查培养皿周围是否有乳白色光晕。

卵磷脂酶试验结果解释

卵磷脂酶试验阳性：白色、不透明、扩散区的外观，延伸到菌落周围的介质中。

卵磷脂酶阴性试验：没有从菌落边缘延伸出来的白色不透明区域。

卵磷脂酶试验的局限性

• 必须维持厌氧条件。
• 卵磷脂酶阴性试验应与未接种的对照平板进行比较，因为卵磷脂酶可扩散到整个琼脂平板，使解释变得困难。
• 产气荚膜菌A型抗毒素不是特异性的C产气荚膜菌；一个积极的纳格勒反应也可以产生C. sordelli,C巴拉蒂如果使用重接种。

卵磷脂酶试验的质量控制

产气荚膜梭菌，ATCC13124:卵磷脂酶阳性

产孢梭菌, ATCC11437:卵磷脂酶阴性