米德尔布鲁克琼脂-组成，原理，制备，结果，用途

表的内容

有很多文化传媒这是多年来用来培养分枝杆菌的。早期的以鸡蛋为基础的配方包括Lowenstein-Jensen培养基和Petragnani培养基。后来，Dubos和Middlebrook开发了各种含有油酸和白蛋白作为关键成分的配方，它们保护分枝杆菌免受有毒物质的伤害，有助于结核杆菌的生长。随后，Middlebrook和Cohn改进了油酸-白蛋白琼脂的配方，得到了分枝杆菌种生长更快、更茂盛的菌种。根据Middlebrook的规定配制了Middlebrook 7H10琼脂基础，Cohn等人对原有的油酸-白蛋白琼脂进行了改造，观察到分枝杆菌种类快速而繁茂的生长。Middlebrook 7H10琼脂基础也用于分离、培养和敏感性试验结核分枝杆菌用OADC生长补充剂和甘油进行富集。据报道，7H10培养基往往比通常用于培养分枝杆菌的以鸡蛋为基础的培养基产生更少的污染物。

图片来源:费舍尔科学

作文麦德的琼脂

米德尔布鲁克7H10琼脂每900毫升

硫酸铵	0.5克
磷酸二氢钾	1.5克
磷酸二钠	1.5克
柠檬酸钠	0.4克
硫酸镁	25.0毫克
氯化钙	0.5毫克
硫酸锌	1.0毫克
硫酸铜	1.0毫克
l -谷氨酸钠	0.5克
枸橼酸铁铵	0.04克
盐酸吡哆醇	1.0毫克
生物素	0.5毫克
孔雀石绿	250.0µg
琼脂	15.0克

pH 6.6 +/- 0.2在25ºC。

麦德OADC浓缩

成分	通用汽车/ L
氯化钠	8.5克
葡萄糖	20.0克
牛白蛋白(V馏分)	50.0克
过氧化氢酶。	0.03克
油酸	0.6毫升

原则麦德的琼脂

米德尔布鲁克琼脂含有多种无机盐，为分枝杆菌的生长提供必要的物质。组分柠檬酸钠，当转化为柠檬酸时，在溶液中保持某些无机阳离子。甘油是碳和能源的丰富来源。在富集介质中，氯化钠提供必要的电解质维持渗透平衡。其中油酸，以及其他长链脂肪酸可被结核杆菌利用，在分枝杆菌的代谢中起着重要作用。培养基中的白蛋白有助于保护结核杆菌免受有毒物质的侵害，因此，它提高了结核杆菌在初次分离时的恢复能力。葡萄糖是可发酵的碳水化合物和能量来源，而过氧化氢酶破坏可能存在于介质中的有毒过氧化物。孔雀石绿染料的存在可实现对细菌的部分抑制。

准备麦德的琼脂

将19克粉末悬浮在900毫升含5毫升甘油的纯净水中。
彻底混合。
加热，频繁搅拌，煮沸1分钟，使粉末完全溶解。
121°C高压灭菌10分钟。
当冷却至50-55°C时，无菌添加100 mL Middlebrook OADC富集液到培养基中。
倒入无菌管中。

结果和解释在麦德琼脂

培养物应在接种后5-7天内阅读，此后每周阅读一次，持续8周。
若要阅读板或瓶，请将解剖显微镜上的容器倒置。
在10-60×透射光下阅读。
快速扫描10-20倍的菌落是否存在。
较高的放大倍数(30-60×)有利于观察菌落形态;也就是蛇形绳状菌落。
记录观察结果:
- 菌落在宏观上可见所需的天数
- 菌落数量(盘子和瓶子):
  - 没有殖民地=否定
  - 少于50个殖民地=实际数量
  - 50-100菌落= 1+
  - 100-200菌落= 2+
  - 几乎汇合(200-500)= 3+
  - Confluent(大于500)= 4+
- 颜料生产
  - 白色、奶油色或浅黄色=无色(NC)
  - 柠檬，黄色，橙色，红色=显色性(Ch)

使用麦德的琼脂

Middlebrook 7H10琼脂，当添加Middlebrook OADC富集液时，用于分枝杆菌分离和培养的定性程序。
用于细菌的分离、培养和敏感性试验结核分枝杆菌．

限制麦德的琼脂

建议对来自纯培养的菌落进行生化、免疫、分子或质谱检测以进行完全鉴定。
由于这种培养基只有部分选择性，如果标本没有经过适当的去污预处理，分枝杆菌以外的细菌可能会生长。
分枝杆菌是严格的需氧菌，其生长受到二氧化碳浓度增加的刺激。管或瓶上的螺旋盖应按指示操作以交换二氧化碳。
米德尔布鲁克7H10琼脂需要在5-10%的CO中培养₂以恢复分枝杆菌的大气。由于未知的原因，分枝杆菌不能很好地从蜡烛灭光罐中恢复。
接种培养基应远离光或过热，因为暴露会导致培养基中释放甲醛，可能会抑制或杀死分枝杆菌。
培养结果阴性并不排除分枝杆菌活动性感染。导致文化培养失败的一些因素有:
- 标本不具有传染性物质的代表性;也就是说，用唾液代替痰。
- 分枝杆菌在标本的消化和去污过程中被消灭。
- 严重的污染干扰了分枝杆菌的生长。
- 在孵育期间没有提供适当的有氧条件和增加的二氧化碳张力。

参考文献

Himedia
正欲
哈代诊断
Conda实验室
热费舍尔

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