改良霍奇试验(MHT)-原理，程序，结果，用途

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改良霍奇试验(MHT)是临床实验室中检测分离病原体产生碳青霉烯酶的一种表型方法。这是一种可靠的方法，以确认分离的细菌病原中的碳青霉烯耐药与碳青霉烯酶的产生有关。

它最初用于碳青霉烯酶的检测肠杆菌科用于流行病学或临床目的。但是，它也发现了它在其他疑似革兰氏阴性菌碳青霉烯酶检测中的作用。

然而，自2018年以来，临床和实验室标准协会(CLSI)将其标记为“碳青霉烯酶筛选的表型方法不再可靠，并建议使用CarbaNP测试和mCIM测试等其他测试。

与其他测试相比，此测试的需求易于访问，且访问率较低。因此，一些小型临床实验室(大多在发展中国家)仍然使用这种测试作为检测碳青霉烯酶的表型方法。

的目标改进霍奇检验(MHT)

  1. 检测碳青霉烯酶的产生。
  2. 检测碳青霉烯耐药是否由于碳青霉烯酶的产生或其他机制。

的原则改进霍奇检验(MHT)

它是基于这样一个原理:被试生物产生的碳青霉烯酶水解碳青霉烯类抗生素，导致碳青霉烯类敏感菌的生长增强大肠杆菌．

如果被测试的生物体产生碳青霉烯酶，它就会在条纹线附近水解扩散的抗生素。这将促进成长大肠杆菌，否则抗生素会抑制条纹附近的细菌。

这种生长增强的结果是缩进生长大肠杆菌并在抑制区域内测试生物体大肠杆菌有三叶草状图案的

要求改进霍奇检验(MHT)

  1. 碳青霉烯敏感大肠杆菌（大肠杆菌ATCC 25922株
  2. Mueller Hinton琼脂(MHA)平板
  3. 测试细菌
  4. 控制细菌:

积极的控制:肺炎克雷伯菌ATCC BAA - 1705 - MHT阳性

消极的控制:肺炎克雷伯菌ATCC BAA - 1706 - MHT阴性

  1. 碳青霉烯类抗生素片(10微克伊特拉培南或美罗培南片)
  2. 棉签或弯曲的玻璃棒(多利棒)和接种环
  3. 其他一般要求，如本生灯，无菌盐水(或肉汤)，0.5麦克法兰标准，镊子，烈酒等。

程序改进霍奇检验(MHT)

  1. 准备0.5麦克法兰标准暂停大肠杆菌ATCC 25922(或大肠杆菌对碳青霉烯敏感的菌株)
  2. 稀释悬浮液用无菌生理盐水或肉汤按1:10的比例(在4.5 mL生理盐水或肉汤中加入0.5 mL混悬液)
  3. 统一条纹或传播的稀释大肠杆菌无菌悬浮液尼古拉斯板(就像平时一样抗菌敏感性试验)晾干约3 - 10分钟。
  4. 放置一个10mcg美罗培南或伊特拉培南的圆盘在接种的MHA平板的中心。

[注:对于一个10厘米的petri板，建议不超过一个(1)盘;CLSI建议15厘米的石化板不超过4个圆盘。

  1. 使用无菌接种环或棉签，挑选3-5个新鲜培养的试验微生物菌落，从培养皿边缘到培养皿边缘沿一条直线从内到外划线。

[注:10 cm的petri板建议不超过1个试验菌和2个对照菌，15 cm的petri板建议不超过6个试验菌和2个对照菌]

[条纹长度最少为20 - 25毫米]

  1. 35(±2)孵育板°C在环境空气中放置16 - 24小时。

的观察改进霍奇检验(MHT)

孵育后，观察增强的生长大肠杆菌并形成三叶草叶片状压痕的交叉条纹的测试有机体(和对照，如果使用)和抑制区域大肠杆菌．

改进霍奇检验(MHT)
图:改良Hodge检验(MHT)结果大肠杆菌DH5α菌株含有野生型和突变型NDM-1和VIM-2基因。以美罗培南(MEM) (10 μg)为底物。括号中描述了MBLs的细胞定位(膜或质周)。P、美罗培南被条带细胞水解;N，美罗培南不被条带细胞水解。图片来源: Fernando Pasteran等，2016．

结果解释改进霍奇检验(MHT)

  1. 促进生长(形成三叶草叶状图案)=阳性结果(碳青霉烯酶产生)
  2. 没有促进生长(没有形成三叶草叶状图案)=阴性结果(没有碳青霉烯酶的产生)

k .肺炎ATCC BAA - 1705将表现出增强的生长大肠杆菌,形成类似三叶草的图案，而k .肺炎ATCC BAA - 1706不会表现出增强的生长大肠杆菌．

读也:

优势

  • 它简单易行。
  • 不需要昂贵的资源。因此可以由较小的实验室和研究所实施。

限制

  • 产生广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC β-内酰胺酶的生物给出假阳性结果。
  • 一些被试生物产生的代谢物会抑制生长大肠杆菌
  • 未能检测到碳青霉烯酶的全部生产，因此经常出现假阴性结果(一些研究显示约25 - 30%的假阴性结果)
  • 需要更长的潜伏期。

参考文献

  1. Amjad A, Mirza Ia, Abbasi S, Farwa U, Malik N, Zia F.改进Hodge试验:一种简单有效的检测碳青霉烯酶产生的试验。伊朗微生物学杂志，2011 Dec;3(4):189-93。PMID: 22530087;PMCID: PMC3330182。
  2. 碳青霉烯酶检测的改良Hodge试验:原理、程序(universe84a.com)
  3. _m100_archived_methods_table.pdf (clsi.org)
  4. Vanessa Bley Ribeiro, Adriano Rostirolla Linhares, Alexandre P. Zavascki, Afonso Luis Barth，“改进Hodge试验的量化性能:对肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶肠杆菌科分离株的评价”，生物医学研究，2014年卷，第139305期，6页，2014年。https://doi.org/10.1155/2014/139305
  5. Ghasemnejad A, Doudi M, Amirmozafari N.改进Hodge试验作为精确检测产kpc肺炎克雷伯菌的非分子检测方法的评价。中国微生物学报。2018;67(3):291-295。doi: 10.21307 / pjm - 2018 - 034。PMID: 30451445;PMCID: PMC7255689。
  6. Triton Hodge试验:用于增强检测NDM和其他碳青霉烯酶产生物的改良Hodge试验的改进方案(asm.org)

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