结核分枝杆菌概述

的栖息地结核分枝杆菌

1. 人只是一个已知的水库。
2. 通常在肺部发现，但也可以住在身体的任何部位。
3. 它们可能是迫使病原体，兼容或机会主义病原体或自由生活。
4. 通常感染单核吞噬细胞。
5. 也可以感染未经高温消耗的牛奶。
6. 可以在灰尘、地毯或衣服中存活数周，在痰中存活数月。
7. 它们也被发现在土壤和水中。

图片来源:Webmd.和NEJM．

形态学结核分枝杆菌

1. 直的或稍弯曲的杆状细杆菌。
2. 非孢子的，非运动的，非被包膜的细菌。
3. 酸快杆菌，既不是克+ ve也不是克。
4. 在抗酸染色时，它们在绿色/蓝色背景下呈现鲜红色到深紫色。
5. 它们测量0.5μmx3μm。
6. 出现在单个，成对，或小笨蛋。
7. 高含量的氰酸（50至60％）。
8. 细胞壁富含脂质和蜡。
9. 由于脂肪酸的存在，它们被包裹在一起。
10. 能够细胞内生长。
11. 它们耐药物，洗涤剂，常见抗生素，染料，污渍，渗透裂解，致命氧化等。

文化的特点结核分枝杆菌

1. 文化是结核病实验室确认的黄金标准。
2. 生长细菌需要进行药物易感性测试和基因分型。

在Lowenstein-Jensen (LJ)介质中

1. 这是一种以蛋为基础的培养基，生长相当缓慢。
2. 在这种类型的媒体上获得视觉殖民地需要6-8周。
3. 菌落无色素，干燥，粗糙，凸起，不规则，表面有皱纹
4. 它们最初是奶油白色，在进一步孵育的情况下变黄或脂肪色。
5. 成长是优生的(在文化中生长得更加繁茂)。
6. 最适温度为35-37℃，最适pH值为6.4 ~ 7。
7. 这是一款迫长的空气十足。
8. 增加二氧化碳(5-10%)增强结核分枝杆菌。
9. 5%的甘油也能促进生长。
10. LJ介质含有抑制剂，以防止污染物溢出结核分枝杆菌。
11. 介质的绿色是由于孔雀石绿的存在，孔雀石绿是防止大多数其他污染物生长的选择剂之一。
12. 现在可以使用中间体或Bactec获得更快的结果。

其他文化媒体用于结核分枝杆菌

固体媒体

1. 鸡蛋 - Petragnini中等和Dorset Medium
2. 中间琼脂半琼..
3. 中间体7h11琼脂
4. 血基-塔希斯中
5. 血清基于 - Loeffler媒体
6. 马铃薯基-波罗斯基中

液体媒体

1. 杜波的媒介
2. middlebrook 7h9肉汤
3. 普罗考尔和贝克的灵媒
4. 苏拉的媒介
5. 萨顿的媒体

生物化学特征结核分枝杆菌

S.N.	生化试验	结果
1	5％NaCl耐受性	负（-ve）
2	68°C过氧化氢酶测试	负（-ve）
3.	酸性磷酸酶	负（-ve）
4	酰胺酶测试	积极（+ ve）
5	芳基血晶酶测试	负（-ve）
6	p-硝基苯甲酸的生长	负（-ve）
7	TCH的生长（10mg / ml）	积极（+ ve）
8	铁的吸收	负（-ve）
9	中性红测试	积极（+ ve）
10.	妮此测试	积极（+ ve）
11.	硝酸盐还原试验	积极（+ ve）
12.	过氧化物酶测试	积极（+ ve）
13.	吡嗪酰胺酶测试	积极（+ ve）
14.	半定量过氧化氢酶测试	负（-ve）
15.	亚碲酸盐还原试验	变量
16.	吐温80水解	负（-ve）
17.	尿素测试	变量

毒力因子结核分枝杆菌

A.霉菌酸和脂多糖(LAM)

• 蜡层，保护细菌免受许多宿主因素和许多抗生素，包括-内酰胺酶。
• 与氰酸络合的梅基二肽（来自肽聚糖）可引起肉芽肿形成，磷脂诱导陷阱坏死。
• LAM在结构和功能上与其他细菌的O抗原脂多糖相关。
• LAM的生物活性包括强血清反应活性、抑制干扰素- γ介导的巨噬细胞活化、诱导巨噬细胞产生和释放细胞因子、清除活性氧中间体、抑制t细胞增殖。
• 林已被鉴定为树突细胞（DC） - 特异性细胞内粘附分子-3抓取非integrin（符号）的关键配体。

B. esx1分泌系统

• 有助于分泌许多蛋白质和酶，帮助有机体在吞噬体中生存。
• 介导细菌产物的递送到巨噬细胞细胞质中。
• 防止溶酶体与吞噬体的融合，从而保护细菌不受吞噬酶体活性的影响。

C.吞噬物质成熟因子

• 抑制早期吞噬体的酸化。
• 超氧化物歧化酶(SOD)是清除宿主活性氧物质(ROS)的一种酶。
• nlA基因产物可能通过干扰宿主细胞凋亡而抑制宿主防御。

发病机制结核分枝杆菌

1.门户网站的入口

• 传染性杆菌通过吸入空气中的飞沫进入人体宿主。
• 宿主的第一道防线试图通过气管和支气管上皮来抵御细菌。
• 当细菌从第一道防线存活下来时，它们会进入肺部。

2.原发性结核

• 细菌被肺泡巨噬细胞吞噬，将细菌困在吞噬体中，溶酶体与吞噬体共同作用，称为吞噬酶体杀死细菌。
• 当细菌存活最初的宿主防御机制时，它攻击肺泡巨噬细胞，获得对肺实质的进入，吞噬物质存活，并诱导局部细胞介导的促炎响应导致肉芽肿形成。
• 肉芽肿保护细菌，通常在初次感染3周后出现。
• 当完全发育时，这个慢性肉芽肿病变包括三个区域
  1. 结核杆菌大的多核巨细胞的中心区域;
  2. 浅色上皮样细胞的中间区域，常呈放射状排列;和
  3. 淋巴细胞区成纤维细胞、淋巴细胞和单核细胞的周围区
• 肉芽肿的中心含有坏死组织和死巨噬细胞的混合物。
• 由于代谢非常活跃，肉芽肿中的巨噬细胞消耗氧气，从而导致病变中心的缺氧和酸中毒，可能杀死大部分的杆菌。
• 肉芽肿形成通常足以限制原发性感染。
• 病变成为静止的，周围的成纤维细胞产生致密的瘢痕组织，这可能被称为众所周央焦点。
• 细胞毒性T细胞和自然杀伤细胞(NK)使满载细菌的巨噬细胞程序性死亡(凋亡)，通过产生代谢爆发杀死结核杆菌，从而促进保护性免疫。

3.潜伏性结核

• 在大多数受感染的个体中，原发性感染消退，但一些残留的结节杆菌进入潜伏期或休眠阶段的阶段。
• 这在免疫表明案件中主要观察到，例如。艾滋病毒或老龄化。

后初级结核病

• 结节杆菌或外源性肝脏的休眠灶的再活化导致原发性结核后，这与原发性疾病的几个方面不同。
• 由于未知的原因，结核的再激活或再感染倾向于在肺的上叶发展。
• 通过活化的巨噬细胞释放的蛋白酶软化并液化勾壳材料，并且过量的肿瘤坏死因子和其他免疫介质引起疾病的浪费和发挥特征。
• 结核瘤的内部是酸性和缺氧，含有很少的可行结节杆菌。
• 最终，不断扩大的病变侵蚀支气管壁，液化物排出，形成通气良好的腔体。
• 肺部的空气中含有高浓度的二氧化碳，是支持细菌生长的理想环境，在肺腔壁上发现大量这样的细菌。
• 一旦腔形成，大量的细菌进入痰液，患者成为开放性或传染性病例。
• 在原发性肺结核后，细菌扩散到淋巴结和其他器官是不寻常的。
• 相反，感染的传播是通过支气管树发生的，因此继发性病变发生在肺的下叶，偶尔也会发生在气管、喉部和口腔。
• 咽痰中的杆菌引起肠道病变。
• 在肾结核病病例中，次生病变也可能在膀胱和附睾中发展。
• 原发性后皮肤结核(寻常狼疮)通常累及面部和颈部。

结核病的临床表现

1.原发或肺结核

• 原发性结核病通常被认为是呼吸道的疾病。
• 常见的呈现症状包括：
• 低级发烧
• 夜汗
• 乏力
• 厌食症(食欲不振)
• 减肥。
• 肺结核病人通常伴有咳嗽，并伴有低烧、寒战、肌痛和出汗;然而，这些体征和症状与流感、急性支气管炎和肺炎相似。

2.传播肺结核

• 除了肺之外的器官可以在感染后参与玉米菌菌复杂的生物。
• 这些器官包括以下内容：
• 泌尿生殖道
• 淋巴结（宫颈淋巴腺炎）
• 中枢神经系统(脑膜炎)
• 骨骼和关节（关节炎和骨髓炎）
• 腹膜
• 心包
• 喉
• 胸膜衬里(胸膜炎)

实验室诊断肺结核引起的结核分枝杆菌

标本和加工

• 痰，支气管式洗涤，刷胶或活组织检查或清晨胃吸出，脑脊液（CSF），尿液
• 来自痰和其他非团体部位的标本应液化N-乙酰半胱氨酸用氢氧化钠去污染(可杀死许多其他细菌和真菌)，用缓冲液中和，离心浓缩。
• 来自无菌位点的标本，如脑脊液，不需要去污过程，但可以直接离心，检查和培养。

直接检测方法

1.显微镜

• 检测分枝杆菌的酸快特性，以通过痰和其他临床材料检测它们Ziehl-Neelsen（Zn）染色技术。
• 红色杆菌在对比色背景下可见。
• 细长、直或略弯曲的杆状物，有筒状或珠状外观。
• 基于相同的抗酸牢度原理的荧光显微镜越来越多地使用，而且不那么累人。

2.文化

• 由于痰和某些其他标本经常含有许多细菌和真菌，这将迅速过度高度过度培养培养基上的任何分枝杆菌，去污方法利用分枝杆菌对酸和某些消毒剂的相对高的抗性。
• 该矿床用于接种Lowenstein Jensen（LJ）培养基。
• 脑脊液和组织活检等不太可能被污染的标本直接接种到培养基上。
• 干燥，粗糙，凸起，皱纹，灰白色到LJ中型的灰色殖民地，通常称为粗糙，强硬和乳沟菌落。
• 使用具有辐射生素的液体介质如Bactec 460 Tb的含量培养方法。

图：8周培养基后洛杉矶·詹森（LJ）琼脂的结核分枝杆菌菌落形态

3.生物化学分析

• 烟酸积累试验:阳性
• 芳基血晶酶测试：阳性
• 中性红色测试：正面
• 过氧化氢酶过氧化物酶试验：过氧化物酶阳性和弱过氧化氢酶阳性
• 酰胺酶测试:积极
• 硝酸盐还原试验：阳性
• Tween 80水解:可变结果
• 吡嗪酰胺敏感性:敏感
• 易患噻吩-2-羧酸酰肼（TCH）：不容易受到影响

4.动物接种

• 多年来，豚鼠接种一直是一种诊断结核病的流行方法，但现在被视为过时。

5.血清诊断

• 通过使用各种分枝杆菌抗原估计特异性IgM、IgA和IgG抗体滴度，ELISA技术已被尝试用于快速诊断不同临床形式的结核病。
• 用胶乳颗粒涂有兔抗体的胶乳凝集试验mberculosis.敏感度为94.4%，特异度为2%。

6.抗原-蛋白质检测

• 近年来使用了微生物产品或组分的检测以诊断由此引起的感染结核分枝杆菌。
• 结核病是一种脂肪酸，可以从分枝杆菌的细胞壁中提取，并通过气相色谱或质谱法检测含有少量分枝杆菌的临床样品中。

7.分子技术

• 在推出市售的杂交测定后，成功使用市售和室外开发的核酸扩增试验以进行早期鉴定玉米菌菌复杂在液体培养物中生长。
• 基于pcr的分枝杆菌鉴定测序包括聚合酶链反应用属特异性引物扩增分枝杆菌DNA并测序。
• 将核苷酸序列与参考序列进行比较，确定该生物体。
• 最可靠的分枝杆菌的序列是约1500bp 16s rRNA基因。

间接检测方法

1.结核菌素试验

• 纯化的蛋白质衍生物（PPD）通过旧结核蛋白的化学分馏获得。
• PPD在其生物反应性作为结核蛋白单位（TU）方面标准化。
• 大量的结核菌素注射到过敏宿主中，可引起严重的局部反应和主要感染部位的炎症和坏死(局灶性反应)。
• 出于这个原因，调查中的结核蛋白试验在0.1ml溶液中使用5μl;在怀疑极端超敏反期的人。
• 放置结核菌素皮试后，不迟于放置后72小时检查该区域是否存在硬结。

结果解释是：

• 对于发展为活动性疾病风险最高的患者(如艾滋病毒感染者、与活动性肺结核患者有过接触的人)，5毫米或更大的硬结被认为是阳性。
• 大于10毫米的人被认为是阳性的，最近感染的可能性增加。这一类别可能包括来自高流行率国家的新移民、注射吸毒者和接触过结核病的卫生保健工作者。
• 对于结核病风险低，15毫米或更大的固定被认为是阳性测试结果。
• 阳性测试结果往往持续数天。弱反应可能会迅速消失。

2.干扰素释放试验(IGRA)

• 有时结核菌素皮肤试验的结果是模棱两可的，特别是对接种过卡介苗的人或生活在NTM在环境中高度流行地区的人。
• 努力提高诊断准确性，全血干扰素释放测定（IGRAS）已商业开发。
• 这些检测是基于宿主对特异性免疫应答mberculosis.ESAT-6(早期分泌抗原靶蛋白-6)、CFP-10(培养滤液蛋白-10)和TB7.7。
• 试验检测响应于这些抗原的敏化CD4T细胞释放的干扰素-γ。

通常用于检测干扰素的两种商业检测方法是:

• Quantiferon-Gold试管内检测(QFT-GIT)是一种酶联免疫吸附试验(ELISA)，用于检测全血中的干扰素。
• T-Spot-Tb是一种使用纯化外周血单核细胞的ELISA免疫检查测定法。

治疗肺结核

构成治疗方案核心的抗结核药物的第一线是

• Isoniazid（INH）
• 利福平（RIF）
• 吡嗪酰胺(PZA)
• ethambutol（emb）
• 世界卫生组织目前的建议是，所有新患结核病的患者，无论疾病部位或严重程度如何，并且在没有耐药性证据的情况下，都应接受6个月的疗程，其中包括2个月的利福平、异烟肼、吡嗪酰胺、乙胺丁醇，然后服用利福平和异烟肼，为期4个月。
• Isoniazid可能导致轻度的精神病紊乱和外周神经病变，特别是在酗酒者中，但这些通常通过规定吡哆醇（维生素B6）来预防。
• 在药物质量差或监管不到位的治疗期间可能产生耐药性(获得性耐药性)，或者患者可能感染耐药菌株(初始或初级耐药性)。
• 多药抗性菌株定义为对异噻唑和利福平的那些，具有或不具有额外药物的抗性。
• 广泛的耐药结核（XDR-TB）的较新类别定义为至少，至少，异喹啉，利福平，氟代喹啉和任何可注射剂。

第二个线药物包括

• 新一代的氟喹诺酮类药物，如莫西沙星，左氧氟沙星或加替沙星。
• 卡那霉素可注射剂，如阿米卡星、卡那霉素或卷曲霉素
• 两种或两种以上的核心二线药物包括乙硫酰胺、丙硫酰胺、环丝氨酸、特利齐酮、氯法齐明或利奈唑胺。

预防肺结核

人类结核病是可预防的:

• 通过对社区中开放性或传染性个体的早期发现和有效治疗
• 通过降低感染的机会，通过减少影响结核病发生率的最重要因素是社会经济的因素，特别是导致房屋和工作场所过度拥挤的人。
• 在有限的程度上，通过疫苗接种，其包括BCG疫苗接种，其出生后的皮内注射给出。
• 建议新生儿接种疫苗，因为先前暴露于环境分枝杆菌的人群可提供一些保护，但在其他情况下会引起不适当的免疫反应，对抗保护。

引用和来源

1. http://textbookofbacteriology.net/tuberculosis.html.
2. http://web.uconnonn.edu/mcbstaff/graf/student%20presentations/mtuberculosis/mtuberculosis.html.
3. http://www.austincc.edu/microbio/2421a/tb
4. http://www.meddean.luc.edu/lumen/MedEd/medicine/pulmonar/diseases/tbthc1.htm
5. http://www.microbeworld.org/component/jlibrary/?view=article&id=6641
6. http://www.microbiologyinpictures.com/mycobacterium%20tuberculosis.html
7. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3865090/
8. http://www.sigmaaldrich.com/technical-documents/articles/microbiology-focus/mycobacteria-identification.html
9. http://www.slideshare.net/deshkar/mycobacterium-tuberculosis-seminar
10. https://en.wikipedia.org/wiki/löwenstein-jensen_medium.
11. https://labtestsonline.org/understanding/analytes/afb-culture/tab/test/
12. https://microbewiki.kenyon.edu/index.php/Mycobacterium_tuberculosis