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硝酸盐还原试验的目标
- 为了确定能够产生称为硝酸还原酶的酶的能力生物体,导致硝酸盐的还原(NO 3)。
- 它还测试生物体在硝酸盐和亚硝酸盐上进行硝化以产生分子氮的能力。
硝酸盐还原试验原理
肠杆菌的所有成员将硝酸盐降至亚硝酸盐,但有些成员进一步将亚硝酸盐代谢到其他化合物。厌氧代谢需要除大气氧(O2)之外的电子受体。许多革兰氏阴性细菌用硝酸盐作为最终的电子受体。能够产生硝酸还原酶酶的生物,然后将硝酸盐(NO 3)转化为亚硝酸盐(NO 2)。通过加入磺酸和α-萘胺来确定硝酸盐对亚硝酸盐的降低。亚硝酸盐与磺酸和α-萘胺的酸溶液反应,形成红色偶氮染料。磺酸和亚硝酸盐反应形成重氮盐。然后重氮盐与α-烷基胺夫妇产生红色,水溶性偶氮染料。在每个测试反应中,红染料的外观表明了没有的存在2-在试管中,无论是未更好的初级基材,还有不需要的产物3.-通过测试生物,或强制减少的产物3.-用还原剂(锌)用于控制目的,表明有机体的硝酸盐减少的负测试结果。将锌的加入将硝酸盐还原为亚硝酸盐,并将亚硝酸盐形成在培养基中形成的亚硝酸,其与磺酸反应。由此产生的重氮化磺酸与α-萘胺反应以产生红色复合物。如果在添加锌后没有发生颜色变化,则表示生物体将硝酸盐将硝酸盐降低到其他氮化合物中。将Durham管置于氮气汤中,以便在接种前检测肉汤的劣化,如管中的气体形成证明,并通过替代途径产生气体的生物体脱氮。
硝酸盐还原试验的反应
- 硝酸盐还原为亚硝酸盐,红颜色形成:阳性测试
2e-+ 2H.++ No.3.-→否2-+ H.2O.
- 硝酸盐不变,负反应。
不3.-
- 硝酸盐将亚硝酸盐还原为一氧化氮,或者进一步向氧化氮或进一步向氮气
不3.-→否2-→否→n2O→N.2
- 硝酸盐直接减少到分子氮。
2号3.-+ 10E-+ 12H.+→N.2+ 6H.2O.
用于硝酸盐还原测试的媒体
Gelatin 20 GM / L的胰腺摘要,KNO3 2 GM / L.
硝酸盐还原试验
- 用细菌悬浮液接种硝酸盐汤。
- 在最佳温度30℃或37℃下孵育管24小时。
- 在加入试剂之前首先孵育N2气体后。
- 加入6-8滴亚硝酸盐试剂A并加入6-8滴亚硝酸盐试剂B.
- 观察在一分钟或更短的时间内进行反应(显色)。
- 如果没有颜色开发添加锌粉。
- 在加入锌后观察到红色以进行红颜色。
结果解释硝酸盐还原试验
反应 | 气体 | 添加解决方案A和B后的颜色 | 加入锌后的颜色 | 解释 |
no3→no2 | 没有任何 | 红色的 | - | No3 +,没有气体 |
NO3→NO2,天然气 部分的 非全星末末端 产品 |
没有任何 | 红色的 | - | No3 +,没有气体 |
no3→no2, 气态结束 产品 |
是的 | 红色的 | - | no3 +,天然气+ |
NO3→气体 最终产品 |
是的 | 没有任何 | 没有任何 | no3 +,no2 +, 天然气+ |
no3→ 非全星末末端 产品 |
没有任何 | 没有任何 | 没有任何 | no3 +,no2 +, 没有气体 |
NO3→没有反应 | 没有任何 | 没有任何 | 红色的 | 消极的 |
硝酸盐还原试验的局限性
- 硝酸盐还原是鉴定进肠杆菌区对属植物的支持性试验;但是,最终识别需要额外的随访,确认测试需要。
硝酸盐还原试验的质量控制
阳性:No3 +,没有气体:大肠杆菌(ATCC25922)
阳性:No3 +,天然气:假单胞菌铜绿假单胞菌(ATCC17588)
消极的:Acinetobacter Baumannii.(ATCC19606)
参考
- Tille下午2014.贝利和斯科特的诊断微生物学。十三个版本。Mosby,Inc。是elsevier Inc.3251 Riverport Lane的联盟。圣路易斯。密苏里州63043
- Buxton R. 2011.硝酸盐和亚硝酸盐还原试验方案。http://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3660
- Becton,Dickinson和公司。BBL硝酸盐肉汤配达勒姆管包插入物。Becton,Dickinson和Company,Sparks,MD。http://bd.com/ds/technicalCenter/inserts/l007480%2807%29%280506%29.pdf.
- Reynolds J1111。Richland College。BIOL 2421。http://delrio.dcccd.edu/jreynolds/microbiology/2420/files/nitrate.pdf.
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