亚硝酸盐还原试验

客观的

测定生物体将亚硝酸盐还原为气态氮或其他含氮化合物的能力。

原则

硝酸盐还原由硝酸盐还原酶介导,表明该生物可以利用NO3.- - - - - -在厌氧呼吸过程中作为电子受体,将硝酸盐还原为亚硝酸盐。另一方面,亚硝酸盐可以被还原为各种氮产品,包括NO, N2O, N2, NH3.这取决于生物体的酶系统和它生长的环境。能够将亚硝酸盐还原为氮的微生物不变色,但在亚硝酸盐还原试验中可以看到气体的产生。N2气体通常在达勒姆管中可见。在没有气体的情况下,假设产物不是N2气体。通过加入磺胺酸和α -萘胺来测定亚硝酸盐的还原。加入试剂后,试管中没有红色着色,达勒姆管中有气体存在,表明亚硝酸盐还原为氮气的测试呈阳性。该测试不需要添加锌粉。

媒体使用

脑-心灌注肉汤(2 g)、胰消化酪蛋白(10 g)、动物组织消化蛋白(5 g)、酵母提取物(3 g)、NaCl (5 g)、NaNO2 (0.1 g),每1000 mL, pH 6.9。

亚硝酸盐还原培养基

牛肉膏 3.0克
明胶胨 5.0克
亚硝酸钾(先2 1.0克
去离子水 1000毫升

过程

  1. 用24小时肉汤培养的微生物接种亚硝酸盐肉汤。
  2. 在35°-37℃下孵育48小时。
  3. 在倒置的达勒姆管中检测48小时的亚硝酸盐肉汤培养是否有氮气,并分别加入5滴硝酸盐试剂A和B,以确定亚硝酸盐是否仍然存在于培养基中。

结果

亚硝酸盐还原试验

图片来源:ASM

积极的测试:加入试剂2分钟后颜色未变红;达勒姆管中的气体生产。

负面测试:加入试剂后,肉汤变红;没有天然气生产。

限制

如果肉汤没有变红,也没有产生气体,就加入锌粉确定亚硝酸盐是否没有被氧化成硝酸盐(因此测试无效)。如果氧化,混合物在加入锌后变红。

质量控制

积极的:变形杆菌(ATCC12453):无色,产气

消极的:鲍曼不动杆菌(ATCC19606):红色显色,无产气

参考

  1. Tille 2014点。贝利和斯科特的诊断微生物学。13版。Mosby, Inc.是Elsevier Inc. 3251 Riverport Lane的子公司。圣路易斯。密苏里州63043
  2. 巴克斯顿r . 2011。硝酸盐和亚硝酸盐还原试验方案
  3. http://www.asmscience.org/content/education/protocol/protocol.3660

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