Ouchterlony双免疫功能技术

  • 免疫扩散是通过它们检测或测量抗体和抗原的技术沉淀这涉及通过诸如琼脂或凝胶琼脂糖的物质的扩散。简单地,它表示凝胶中的沉淀。
  • 它是指用于获得抗体与其特定抗原之间的沉淀物的几种技术之一。
  • 免疫分解反应基于以下方式进行分类:
  1. 扩散的反应物数量(单扩散/双重扩散)
  2. 扩散方向(一个尺寸/两维)
  • 因此,它们可能是以下类型:
  1. 单个尺寸中的单一扩散
  2. 单个扩散在两个维度
  3. 双重扩散在一个维度
  4. 双重扩散两维

双免疫扩散

  • 双免疫变化是琼脂凝胶免疫分配。
  • 在凝胶上是一种特殊的沉淀反应,其中抗体与形成大抗原抗体复合物的特异性抗原反应,其可以观察为沉淀物的线。
  • 在双免疫分子中,允许抗体和抗原散到凝胶中。
  • 在其各自的隔室中施加反应物之后,在等当地形成抗原和抗体朝向彼此逐渐扩散,并且在等同的地方形成。

双重扩散在一个维度

该方法还称为Oakley-ulthrope程序涉及在试管中掺入琼脂凝胶中的抗体,在上述将一层平原琼脂放置。然后将抗原分层在该平原琼脂的顶部。在孵育期间,抗原和抗体通过平原琼脂的中间层朝向彼此移动。在这种平原琼脂的区域中,抗原和抗体均彼此反应,以形成其最佳浓度的沉淀带。

双重扩散两维

它更常见称为Ochterlony双重扩散或被动双免疫分离。在该方法中,抗原和抗体均通过琼脂凝胶在两个尺寸下独立地扩散,水平和垂直。

目标

Ouchterlony双免疫功能测试可以与以下一个或多个目标进行:

  1. 检测抗原 - 抗体复合物。
  2. 描述抗原 - 抗体复合物沉淀出的情况。
  3. 检测抗原特异性抗体的存在。
  4. 测试抗原之间的相似性。

原则

在测试中,将抗原溶液或吸息样品提取物置于凝胶平板上的孔孔中,而血清或纯化的抗体被置于其他剩余孔中(主要是抗体良好地放置良好的抗体。在孵育时,溶液中的抗原和抗体各自扩散出各自的孔。在识别抗原的抗体的情况下,它们在一起相互作用以形成可见的免疫复合物,其在凝胶中沉淀出来,得到表示反应的薄白线(沉淀素线)。

在填充不同抗原混合物和抗体的多个孔中,在两个特定孔之间产生的沉淀表示相应的抗原 - 抗体。

需要材料

玻璃板或培养板,琼脂糖,凝胶钻,缓冲液,抗血清,抗原溶液

程序

  1. 通过沸腾溶于10ml缓冲液中100mg琼脂糖以完全溶解琼脂糖。
  2. 将55℃冷却至55℃并将琼脂糖溶液倒入放置在水平表面上的清洁玻璃板(培养皿或矩形板)上的1-2mm的深度。
  3. 让凝胶设置30分钟。
  4. 如果使用,使用与模板上的标记对应的凝胶钻孔器冲入凝胶中。
  5. 在抗原和抗血清(相同或不同的稀释液)溶液填充孔,直到弯月面消失。抗血清通常被置于中央孔中,并将不同的抗原添加到中心井周围的孔中。
  6. 将玻璃板在湿室中孵育过夜,在37℃下过夜。

结果

  • 抗血清和抗原孔之间不透明沉淀物的存在表明抗原 - 抗体相互作用。
  • 没有沉淀剂的线表明没有反应。
  • 当使用多于一个井时,基于所选择的抗原和抗体的反应性存在许多可能的结果。

Ouchterlony双免疫功能技术

  • 结果可能是以下之一:
    • 完整的身份(即连续线):它们的结沉淀的沉淀线形成弧形代表血清学特性或抗原中常见表位的存在。
    • 非身份(即两行交叉完全):交叉线的模式证明了两种单独的反应,并表明比较的抗原不相关并不共享常见表位。
    • 部分身份(即一端用刺的连续线):这两种抗原共享常见表位,但是抗原没有捕获一些抗体分子并通过初始沉淀素线横穿以与更复杂的抗原中发现的额外表位联合。
  • 形式的线条的图案可以确定抗原是否相同。

应用程序

  1. 它可用于分析抗原和抗体。
  2. 它用于检测,鉴定和定量抗体和抗原,例如免疫球蛋白和可提取的核抗原。
  3. 琼脂凝胶免疫分离子被用作历史上据报道的血清学测试,以鉴定对各种致病生物的抗体如卵囊
  4. 小锥性血型抗体抗体的示范。
  5. 鉴定真菌抗原。
  6. Elek在凝胶中的降水试验是用于证明毒性的特殊测试棒状杆菌白喉。

参考

  1. https://www.abbexa.com/double-immunodiffusion
  2. Bailey,格雷厄姆S.(1996)。“135:Ochterlony双免疫分解”。在Walker,John M.蛋白质协议手册(PDF)。VII:免疫化学技术。TOWA,新泽西州:Humana媒体。第749-752页。检索到2018-07-04。
  3. Lydyard,下午,Whelan,A。,Fanger,M.W。(2005).immunology(2 ED)。伦敦:BIOS科学出版商。
  4. Parija S.C.(2012)。微生物学与免疫学教科书。(2 ED。)。印度:印度elessvier。
  5. Amrita.edu,。(2011)。ochterlony双重扩散 - 模式。从vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=70&sim=689&cnt=1中检索到2018年7月4日

2关于“Ouchterlony双免疫功能区”的思考

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