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- 纸张色谱(PC)是一种平面的类型色谱法其中色谱手术在专用纸上进行。
- PC被认为是色谱技术最简单,最广泛使用的色谱技术,因为它适用于分离,鉴定和定量测定有机和无机化合物的测定。
- 它是由德国科学家Christian Friedrich Schonbein(1865)首次介绍的。
纸张色谱类型
- 纸吸附色谱法
用二氧化硅或氧化铝浸渍的纸作为吸附剂(固定相)和溶剂作为流动相。
- 纸隔离色谱法
在滤纸中,存在于纤维素纤维孔隙中的水分作为固定相,另一流动相作为溶剂。一般来说,纸层析主要是指纸的分割层析。
纸色谱原理
分离原则主要是分区而不是吸附。物质分布在固定相和流动阶段之间。滤纸中的纤维素层含有作为固定相的水分。有机溶剂/缓冲剂用作流动相。显影溶液通过其传递携带样品的固定相。样品的组分将根据它们对固定相的强烈粘附在静止相中,随着它们的溶解在流动相中,样品的组分。
纸张色谱仪表
- 使用的固定阶段和纸张
- 移动阶段
- 开发室
- 检测或可视化代理
1.固定阶段和论文
- Whatman筛选不同等级的纸,如No.1,No.2,3,4,40,No.40,40号等等
- 一般纸张中含有98-99%的α-纤维素,0.3 - 1%的β -纤维素。
其他修改论文
- 酸或碱洗涤滤纸
- 玻璃纤维型纸。
- 亲水纸 - 用甲醇,甲酰胺,乙二醇,甘油等改性纸。
- 疏水纸 - OH基团的乙酰化导致疏水性质,因此可用于反相色谱。
- 也可以制备二氧化硅,亚马尼察或离子交换树脂的浸渍。
2.纸张色谱流动阶段
- 可以使用纯溶剂,缓冲溶液或溶剂的混合物。
例子-
亲水流动阶段
- 异丙醇:氨:水9:1:2
- 甲醇:水4:1
- 正丁醇:冰醋酸:水4:1:5
流动相的疏水性
- 二甲醚:环己烷煤油:70%异丙醇
- 通常使用的溶剂是极性溶剂,但选择取决于要分离的物质的性质。
- 如果纯溶剂没有令人满意的分离,则可以应用合适极性的溶剂的混合物。
3.色谱室
- 色谱室由玻璃,塑料或玻璃等许多材料组成不锈钢。玻璃罐是最优选的。
- 它们可提供无风化尺寸,具体取决于纸张长度和开发类型。
- 室内气氛应饱和溶剂蒸汽。
纸张色谱中的步骤
在纸张色谱中,将样品混合物施加到一块滤纸上,将纸的边缘浸入溶剂中,溶剂通过毛细作用向上移动纸张。基本步骤包括:
选择坚固的支持
优质纤维素纸具有定义的孔隙率,高分辨率,样品扩散可忽略不计,并有利于溶剂的良好运动率。
选择流动阶段
可以根据分析物使用不同的有机和无机溶剂组合。
例子。丁醇:乙酸:水(12:3:5)是用于分离氨基酸的合适溶剂。
坦克饱和度
在将溶剂置于罐中以获得更好的分辨率之前,罐的内壁用滤纸包裹。
样品制备及上样
如果使用固体样品,则将其溶解在合适的溶剂中。使用微移液管和风干的空气将样品(2-20UL)添加在基线上,以防止扩散。
色谱图的开发
样品装载过滤纸仔细浸入溶剂中不超过1厘米的高度,并等待直至溶剂前线靠近纸张的边缘。
可以使用不同类型的开发技术:
提升发展
- 与常规类型一样,溶剂抗重力。
- 将斑点保持在纸的底部,并在底部的具有移动相溶剂的腔室中保持在腔室中。
下降型
- 这在特殊的腔室中进行,其中溶剂支架位于顶部。
- 该点保持在顶部,溶剂流下纸张。
- 在该方法中,溶剂从上到下移动,所以它被称为下降色谱。
上升 - 下行发展
- 以上两种技术的混合称为上升-下降色谱法。
- 只有分离的长度增加,首次上升,然后下降。
循环/径向发展
- 斑点被保存在圆形纸的中心。
- 溶剂在中心的芯中流过芯,并均匀地铺设。
烘干色谱图
开发后,溶剂前线标记,左侧干燥在干燥的柜或烤箱中。
检测
通过用碘蒸气,茚三酮等试剂染色检测无色分析物,
通过分别测量放射性和繁殖来检测的放射性标记和荧光标记的分析物。
R.F值
混合物中的一些化合物几乎与溶剂一样远;有些人靠近基线。相对于溶剂行进的距离是特定化合物的恒定,只要其他参数如纸张的类型和溶剂的精确组成是恒定的。相对于溶剂行进的距离称为RF值。
因此,为了获得纸张色谱实验中的组分的运动程度的措施,在显影色谱图中针对每个分离的组分计算“RF值”。RF值是定义为从应用程序点的组件行进的距离定义的数字。
纸张色谱的应用
- 检查药物的纯度的控制,
- 用于检测掺假剂,
- 检测食品和饮料中的污染物,
- 在熟练和发酵的研究中,
- 用于动物和人体内药物和兴奋剂的检测
- 在化妆品分析中
- 生物化学实验室反应混合物分析。
纸色谱法的优点
- 简单的
- 迅速的
- 纸张色谱法需要非常少的定量材料。
- 与其他色谱法相比,纸张色谱比较便宜。
- 可以通过纸张色谱法鉴定未知的无机和有机化合物。
- 与其他分析方法或设备相比,纸张色谱不会占用太多空间。
- 优秀的分辨能力
纸色谱法的局限性
- 在纸张色谱上不能施加大量样品。
- 在定量分析中,纸张色谱法无效。
- 复杂的混合物不能通过纸张色谱法分离。
- 精度低于HPLC或HPTLC
参考文献
- http://frndzzz.com/advantares-and-disAdvantares-of-paper-chromatogres.
- https://www.slideshare.net/shaisejacob/paper-chromatography-pptnew?next_slideshow=1
- https://www.slideshare.net/shaisejacob/paper-chromatography-ppt-new.
- https://www.biochemden.com/paper-chromatograme/
- http://web.engr.oregonstate.edu/~rochefow/k-12%20outreach%20Activities/microfluidics%20&%20pregnance%20test%20kit%20lab/paper%20Chromato_Chemguide.pdf.
- https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ ad60051a002
请告诉我滤纸在色谱中的缺点是什么
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为什么最好使用糖的最远的距离,如果溶剂越过纸张,并且在运行程序后加热色谱纸的目的是什么?
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