火箭免疫电泳-目的，原理，步骤，结果，应用，优点和限制

• 火箭免疫电泳是劳雷尔对放射免疫扩散的一种适应。它也被称为电免疫分析法或电免疫扩散法。
• 由于在反应结束时析出素带呈锥形结构(火箭状)，所以被称为“火箭电泳”。
• 在火箭免疫电泳抗原在电场中在含有适当抗体的琼脂糖层中迁移。
• 抗原向阳极的迁移产生火箭状的沉淀。火箭下方的面积与抗原浓度成正比。

火箭免疫电泳的目的

1. 检测抗原-抗体复合物。
2. 测定未知样品中抗原的浓度。

火箭免疫电泳原理

火箭免疫电泳是一种定量的一维单次电免疫扩散技术。在这种方法中，抗体被纳入凝胶中，其pH值使抗体基本上保持不移动。抗原被放置在凝胶中切割的孔中。然后电流通过凝胶，这有利于带负电荷的抗原迁移到琼脂。当抗原从孔中移出并进入琼脂糖凝胶时，它与抗体结合形成可见的免疫复合物。在初始阶段，抗原大量超过抗体，没有可见的沉淀发生。然而，随着抗原样品在琼脂糖凝胶中的进一步迁移，会遇到更多的抗体分子与抗原相互作用形成免疫复合物。这导致沉淀线的形成是锥形的形状，像火箭。

抗原在孔中装载的量越大，抗原在与足够的抗体相互作用形成沉淀之前必须在凝胶中移动得越远。因此，从孔到顶点的火箭高度和面积与样本中抗原的数量成正比。

火箭免疫电泳所需材料

琼脂糖，抗原，抗血清，分析缓冲液，电泳仪器，玻片

火箭免疫电泳程序

1. 大约15毫升1%的琼脂糖凝胶被制备出来。
2. 溶液冷却到55-60度^oC和250 μ l抗血清加入13 ml琼脂糖溶液。混合良好，抗体分布均匀。
3. 将含有抗血清的琼脂糖溶液倒在无脂玻璃板上，放置在水平面上，让凝胶凝固30分钟。
4. 玻璃板在模板上，用凝胶打孔机打孔。
5. 将10 μ l的标准抗原和试验抗原样品加入孔中。
6. 将1X TBE缓冲液倒入电泳槽，使其刚好覆盖凝胶。
7. 电泳在80-120伏和60-70毫安的电压下进行，直到抗原从孔中移动3-4厘米。
8. 玻璃板在37度的潮湿室中孵育过夜^oC和结果解释。
9. 如果反应呈阳性，则标记沉淀素峰尖，并测量从井的上边缘到峰尖的峰高。
10. 将火箭高度(y轴)与抗原浓度(x轴)绘制在半对数曲线图上。未知物质的浓度由图中浓度与火箭高度的关系确定。

结果的解释火箭免疫电泳

• 从装载孔中向外扩散的沉淀“火箭”表示阳性反应或特异性抗原-抗体反应，因为抗原特异性抗体的存在。
• 没有沉淀表明没有反应或没有相应的抗体抗原。
• 火箭的高度及其面积与样品中抗原的含量成正比，即沉淀素峰的高度取决于装载在相应孔中的抗原浓度。

火箭免疫电泳技术的应用

1. 火箭电泳主要用于血清中抗原的定量测定。
2. 在自动化方法出现之前，该方法已用于人血清蛋白的量化。
3. 测定蛋白质混合物中特定蛋白质的浓度
4. 免疫球蛋白蛋白酶活性的测定。
5. 处理有机体之间抗原关系的研究。
6. 酶活性电泳。

火箭免疫电泳的优点

• 简单，快速，可复制的方法。
• 在一个平板上可以分析几个未知样品。
• 蛋白质浓度低至1µg/mL，只需在井中装入20 ng的蛋白质即可测量。

火箭免疫电泳的局限性

• 这些技术可以定量分析抗原，但不适用于复杂的混合物。

相关技术

融合火箭免疫电泳是一种改良的一维定量免疫电泳，用于详细测量蛋白质分离实验中的蛋白质组分。

二维免疫电泳是火箭电泳的变种。测试分为两个阶段。在第一阶段，用电泳分离溶液中的抗原。在第二阶段，再次进行电泳，但与第一阶段电泳垂直，以获得火箭状的沉淀。

参考文献

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