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坂口测试定义
坂口试验是一种生物化学试验，由比色反应组成，用于胍基的检测和定量，用作游离或蛋白质中的精氨酸的定性检测。这种测试是由日本食品科学家坂口昭代于1925年发现并以其名字命名的。坂口试验是颜色反应的一个例子，或为检测氨基酸或蛋白质．该试验是精氨酸的一种特殊试验，精氨酸的胍基与1-萘酚或α-萘酚反应生成彩色产品。这是一种定性检测，由于试剂显色速度慢，某些胍基被试剂破坏，阻碍了精氨酸的定量。
坂口试验的目的
- 检测游离形式或蛋白质中精氨酸的存在。
坂口检验原理
坂口试验是基于1-萘酚与精氨酸中的胍基在氧化剂存在下的反应原理。反应的确切机理尚不清楚;然而，由于形成了类似吲哚的结构，该反应导致了红色络合物的形成。坂口试剂由次溴酸钠和1-萘酚组成。次溴酸钠作为氧化剂，促进两个精氨酸分子之间的氢键。
图片来源:Zlir萨那．
需求
试剂
- 坂口试剂:1%萘酚乙醇加几滴10%次溴酸钠溴水溶液。
- 40%的氢氧化钠
- 样品(0.1%精氨酸或0.1%肌酸)
所需的材料
- 试管
- 试管架
- 吸量管
坂口试验程序
- 在试管中加入约3ml的测试溶液，在其中加入1ml的40% NaOH并正确混合。
- 然后，在同一个试管中加入两滴1-萘酚，并充分混合。
- 现在，加入4-5滴10%的次溴酸钠或溴水。
- 观察试管的颜色发展。
坂口检验结果及解释
- 积极的结果:坂口氏试验的阳性结果是红色的形成。这表明存在精氨酸或胍化合物。
- 负面结果:坂口氏试验的阴性结果是没有红色。这表明缺乏精氨酸或胍化合物。
坂口检验的应用
- 坂口试验是一种检测蛋白质中游离或结合形式精氨酸的生化试验。
- 该测试是定性的，但可以通过加入稳定着色产品的尿素进行定量。
限制
- 由于坂口的反应速度较慢，用这种试验无法对着色产品进行定量分析。
- 同样，溶液中的一些胍基可能被次氯酸盐破坏，导致检测结果困难。
参考文献
- Webner C.J(1929)。坂口反应对精氨酸定量测定的修饰。JBC。12月27日。
- 柯，珊和罗伯特·哈泽尔科恩。Sakaguchi反应产物猝灭藻胆体荧光，使测定鱼腥藻菌株PCC 7120细胞中的精氨酸浓度成为可能。细菌学杂志中国科学(d辑:自然科学版)，2015(4):533 - 533。doi: 10.1128 / JB.01512-12
- 蒂瓦里，A.(2015)。实际的生物化学。LAP Lambert学术出版社。