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盐饱和试验定义
盐饱和度试验是利用盐析技术对蛋白质的沉淀及其与其他蛋白质的区别进行的一种试验。盐析是通过增加溶液中盐的浓度来沉淀蛋白质的过程。在这种技术中使用的盐大多是中性矿物盐，如MgSO4, Na2所以4，和(NH)2所以4．盐增溶试验也有助于蛋白质的分化，因为一些蛋白质在较低的盐浓度下沉淀，而另一些则需要较高的盐浓度。用于测试的试剂可能会因偏好不同而有所不同，因为像硫酸铵这样的盐的溶解度更高。盐饱和度测试可以进行半饱和或完全饱和，这取决于所检测的蛋白质类型。在半饱和状态下，溶液被盐半饱和，而在完全饱和状态下，溶液被盐完全饱和。
盐饱和度试验的目的
- 检测:检测给定样本中蛋白质的存在
- 区分蛋白质，如白蛋白和球蛋白。
- 根据蛋白质的溶解度来纯化和分离大量的蛋白质。
盐饱和度测试原理
蛋白质本质上是胶体的，因为大量电荷的存在会产生排斥，阻止粒子的结合。类似地，在每个蛋白质分子周围也形成了水合作用的外壳，蛋白质被水分子薄膜包围着。盐析技术的机理是排除蛋白质分子周围的水化层，使盐分子优先溶剂化。当向溶液中加入有机盐时，蛋白质的有效水浓度降低，最终导致蛋白质的沉淀。这个过程涉及到两种不同的机制。
首先，高浓度的矿物盐通过渗透作用将蛋白质周围水化层的水去除，然后耗尽每个蛋白质颗粒周围的固定层的水。其次，矿物盐的正离子和阴离子与蛋白质颗粒上各自的反离子基团结合，降低蛋白质表面电荷。这两种机制都有助于蛋白质颗粒的聚集和沉淀。蛋白质沉淀所需的盐浓度取决于蛋白质的表面积。像白蛋白这样的小分子有更大的表面积，这需要更高浓度的盐，而像酪蛋白、明胶和球蛋白这样的大分子有更小的表面积，需要更低的浓度。
需求
试剂
- 固体硫酸铵
- 硫酸铵饱和溶液
- 40%的氢氧化钠
- 1%硫酸铜溶液
- 示例解决方案
所需的材料
- 试管
- 试管架
- 使滴下的东西
- 吸量管
- 滤纸
盐饱和度测试程序
一半饱和
- 在一个试管中，取3毫升的测试溶液。在此基础上，加入3毫升饱和硫酸铵溶液。
- 将溶液正确混合，静置约5分钟。
- 然后对溶液进行过滤，以去除其余滤液形成的残渣。
- 的缩二脲试验对滤液的其余部分进行。
完全饱和
- 在一个试管中，取3毫升的测试溶液。在此基础上，加入一定量的固体硫酸铵。
- 然后通过摇晃混合溶液，直到固体盐溶解。不断地加入固体硫酸铵，直到没有更多的盐能溶解。
- 然后让溶液静置5分钟，然后过滤残渣。
- 对滤液进行双缩脲试验。
盐饱和度试验结果及解释
一半饱和
- 半饱和条件下溶液中白色沉淀的形成表明了一个积极的结果。这个结果证实了溶液中存在球蛋白。
- 没有白色沉淀代表阴性结果，表明样品中没有球蛋白。
- 如果在Biuret测试过程中形成了紫色，这表明溶液中存在其他蛋白质。双缩脲测试阴性说明没有其他蛋白质。
完全饱和
- 在完全饱和条件下，溶液中白色沉淀的形成表明了一个积极的结果。这个结果证实了溶液中白蛋白的存在。
- 没有白色沉淀代表阴性结果，表明样品中没有白蛋白。
- 如果在Biuret测试过程中形成了紫色，这表明溶液中存在其他蛋白质。双缩脲测试阴性说明没有其他蛋白质。
盐饱和度测试的用途
- 盐饱和度试验可用于白蛋白、球蛋白等蛋白的检测。
- 由于试验中蛋白质的沉淀是由于溶解度降低而不是变性，所以沉淀的蛋白质可以用来检测蛋白质的浓度。
- 该试验也可用作去除结合脂质或核酸的蛋白质纯化方法。
- 试验中使用的矿物盐通过优先溶剂化有助于蛋白质的稳定。盐(NH)2所以4抑制细菌生长和蛋白质上的蛋白酶活性。
盐饱和度测试的局限性
- 当使用固体硫酸铵时，溶液中可能会形成结块。为了避免这种情况，应该使用臼和杵。
- 使用低级矿物盐可能会导致重金属污染，抑制沉淀过程。
- 在线计算器可以用来确定饱和所需的固体硫酸铵的数量。
- 使用硫酸铵可能会导致溶液酸化，从而减慢处理过程;因此，可以添加Tris缓冲区。
参考文献
- 温菲尔德，P. "用硫酸铵沉淀蛋白质。"蛋白质科学的当前协议附录3(2001):附录3F。psa03fs13 doi: 10.1002/0471140864.
- D(2012)。生物化学。14版。学术出版商。加尔各答。
- https://studylib.net/doc/5791302/19.-salt-saturation-test
- https://alevelbiology.co.uk/notes/test-for-proteins