系列稀释-定义，公式，计算器，程序，用途

系列稀释，顾名思义，是一系列的连续稀释，将密集的溶液转化为更可用的浓度。

• 简单地说，串联稀释就是用一个相关的稀释因子逐步稀释溶液的过程。
• 在生物学上，连续稀释常与降低培养细胞的浓度有关，以简化操作。

图片来源:Chromoscience

连续稀释的目标

• 连续稀释法的目的是通过列举从样品连续稀释培养的菌落数量来估计未知样品的浓度(生物体、细菌、病毒或菌落的数量)。
• 在串联稀释法中，每一步都降低细胞的密度，这样就可以通过计算整个串联的总稀释量来计算原溶液中细胞的浓度。
• 通常进行连续稀释，以避免不得不移液非常小的体积(1-10µl)来稀释溶液。
• 通过受控的方式稀释样品，可以获得培养培养皿，培养皿的菌落数量很容易计数(约30-100)，并计算出样品中存在的微生物数量。

连续稀释公式/计算

• 连续稀释涉及到取样品并通过一系列标准体积的无菌稀释剂稀释样品的过程，无菌稀释剂可以是蒸馏水或0.9%的生理盐水。
• 然后，每一种稀释液的一小部分被用来制作一系列倒或扩散板．
• 根据样品中细胞/生物的估计浓度，确定稀释程度。例如，如果一个水样是从一个严重污染的环境中提取的，稀释因子就会增加。相反，对于污染较少的样品，低稀释因子可能就足够了。
• 连续两倍和十倍稀释通常用于测定抗体滴度或在实验室制备稀释的分析物。
• 串联稀释中的稀释因子可以确定为单个试管，也可以计算为整个串联的总稀释因子。
• 一组中每个试管的稀释系数:

10倍稀释，1毫升样品加入9毫升稀释剂。在这种情况下，试管的稀释因子将是:

• 在第一管之后，每一管都是前一稀释管的稀释液。

现在，对于总稀释因子，

• 第二管的总稀释因子=第一管的稀释系数×第二管的稀释系数。

例子:

对于第一根试管，稀释因子= 10^－1(1毫升加到9毫升)

对于第二管，稀释因子= 10^－1(1毫升加到9毫升)

总稀释因子=上一管稀释倍数×下一管稀释倍数

=总稀释10^－1×10^－1= 10^－2

在线串行稀释计算器

AAT生物探索公司(https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution)

默克公司(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/stockroom-reagents/learning-center/technical-library/solution-dilution-calculator.html）

万能计算器(https://www.omnicalculator.com/chemistry/serial-dilution）

Endmemo (http://www.endmemo.com/bio/dilution.php）

Handymath (https://handymath.com/cgi-bin/serdil6.cgi?submit=Entry）

生物科学(https://www.tocris.com/resources/dilution-calculator）

生理学网站(https://www.physiologyweb.com/calculators/dilution_calculator_mass_per_volume.html）

赛立化工(https://www.selleckchem.com/dilutioncalculator.jsp）

ApexBio科技(http://www.apexbt.com/dilution-calculator）

CiteAb (https://www.citeab.com/toolbox/dilutions）

毛茸茸的青蛙(http://fluffyfrog.net/calc/）

功能生物科学(https://functionalbio.com/web/calc.php）

CUSABIO (https://www.cusabio.com/m-298.html）

连续稀释程序

以下是将样品稀释10倍至稀释因子10的程序⁶：

1. 样品/培养在一个试管和6个试管中，每个试管中有9ml无菌稀释剂，可以是蒸馏水或0.9%盐水，取。
2. 取无菌移液管。
3. 将1毫升混合好的样品/培养物抽入移液管。
4. 然后将样品添加到第一个试管中，使总体积为10ml。这提供了10的初始稀释度^－1．
5. 通过几次排空和填充移液器来充分混合稀释剂。
6. 移液管尖端被丢弃，一个新的移液管尖端被连接到移液管上。
7. 现在，从10个中取出1毫升的混合物^－1稀释和被排入第二管。第二个试管的稀释系数为10^－2．
8. 然后对剩下的试管重复同样的过程，从前一个试管中取出1ml，加入下一个9ml的稀释剂中。
9. 由于使用了6个试管，细菌/细胞的最终稀释度将为10⁶(百万分之一)。

连续稀释法应用程序/使用

连续稀释在许多实验科学中进行，如生物化学，药理学，物理学和顺势疗法。

1. 在微生物学中，连续稀释用于估计样品中细胞/生物的浓度或数量，以获得具有易于计数的菌落数量的孵育板。
2. 在生物化学中，连续稀释用于从较高的浓度中获得所需浓度的试剂和化学品。
3. 在制药实验室中，进行连续稀释以获得必要的化学和化合物浓度，因为这种方法比单独稀释更有效。
4. 在顺势疗法中，顺势疗法稀释是用一种物质在蒸馏水或酒精中稀释。据信，稀释剂通过激活其生命力来增加稀释物质的效力。

连续稀释法限制/问题

尽管连续稀释在实验室中是一种有用的技术，但它也面临着一些挑战。其中一些是:

1. 在样品的传播过程中可能会发生错误，传输的不准确性导致传输的准确性和精确度降低。这导致了最高的稀释有最多的不准确性和最低的准确性。
2. 由于序列稀释是逐步进行的，它需要更长的时间，这限制了该方法的效率。
3. 串行稀释只能减少细菌/细胞，而不能像流式细胞术那样分离细菌/细胞。
4. 这项技术还需要高度训练的微生物学家和无菌技术专家。

连续稀释法例子

• 日常生活中一个简单的连续稀释例子是茶或咖啡。在咖啡中，我们加入一定量的冷滤咖啡，并在上面加水，以获得所需的咖啡浓度。
• 另一个连续稀释的例子是在化学中稀释酸和碱以获得所需的浓度。
• 通过电镀技术对培养物进行连续稀释以确定给定样品中的细菌数量也是连续稀释的一个基本例子。

参考文献

• 微生物学基本实用手册。普通微生物学会。检索自https://microbiologyonline.org/file/7926d7789d8a2f7b2075109f68c3175e.pdf
• Avishai Ben-David, Charles E. Davidson，序列稀释实验的估计方法，微生物学报，第107卷，2014，页214-221,ISSN 0167-7012，
• 卡伦，J. J.和麦金太尔，H. L.(2016)。利用连续稀释培养法枚举经过压载水处理的浮游生物自然群落中存活的浮游植物。应用生理学杂志，28(1), 279 - 298。https://doi.org/10.1007/s10811-015-0601-x
• https://www.biomol.com/dateien/Bethyl-Serial-Dilutions.pdf
• https://bio.libretexts.org/Bookshelves/Ancillary_Materials/Laboratory_Experiments/Microbiology_Labs/Microbiology_Labs_I/04%3A_Dilution_Worksheet_and_Problems

来源

• 6% - https://www.biomol.com/dateien/Bethyl - serial - dilations .pdf
• 3% - https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167701214002577
• 2% - https://www.coursehero.com/file/p71b91p/Serial-dilution-involves-taking-a-sample-and-diluting-it-through-a-series-of/
• 1% - https://www.wikihow.com/Do-Serial-Dilutions
• 1% - https://www.itwreagents.com/iberia/en/protein-biochemistry-and-electrophoresis
• 1% - https://quizlet.com/204569044/serial-dilutions-mastering-microbiology-lab-homework-flash-cards/
• 1% - https://quizlet.com/103092600/lab-quiz-2-flash-cards/
• 1% - https://en.wikipedia.org/wiki/Homeopathic_dilutions
• 1% - https://en.wikipedia.org/wiki/Colony-forming_unit
• 1% - http://dbpedia.org/page/Serial_dilution
• <1% - https://www.thoughtco.com/dilutions-from-stock-solutions-606085
• <1% - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3941987/
• <1% - https://www.coursehero.com/file/16914203/Lab-Report-Dilutions/
• <1% - https://saveearthnow2015.wordpress.com/2015/06/28/analysis-of-drinking-water-contamination-2015/
• <1% - https://nepis.epa.gov/Exe/ZyPURL.cgi?Dockey=300014TD.TXT