目录
TSIA测试的目标
- 确定革兰氏阴性杆菌是否发酵葡萄糖和乳糖或蔗糖，形成硫化氢（H 2 S）。
- 将肠杆菌的成员区分开来自其他人的成员克消极棒。
TSIA测试原理
三糖铁琼脂（TSIA）测试旨在区分肠杆菌的不同群体或属，这是能够通过生产酸发酵葡萄糖的所有革兰片负杆菌，并将它们与其他革兰氏阴性肠道杆菌区分开来。分化基于葡萄糖和乳糖或蔗糖和硫化氢的发酵（H.2s）生产。Tsia培养基含有10份乳糖：10份蔗糖：1份葡萄糖和蛋白胨。苯酚红色和硫酸亚铁分别用作酸化和H 2 S形成的指标。掺入用于检测碳水化合物发酵的酸碱指示剂酚红色由橙红在酸存在下的碳水化合物培养基的颜色变化表明。在蛋白胨的氧化脱羧的情况下，碱性产物被构建并升高。这是由橙色红色到深红色的颜色的变化表示。介质中存在的硫代硫酸钠和硫酸亚硫酸铁检测硫化氢的产生，并通过管中的布线中的黑色表示。
首先通过发酵生物首先使用葡萄糖，并且整个培养基在8至12小时内变为酸性（黄色）。即使在18至24小时孵育期后，均为酸性的恒生仍然是由于葡萄糖在管中的厌氧条件下的葡萄糖下发酵而导致有机酸。然而，由于在倾斜的有氧条件下的发酵产物氧化，倾斜恢复到碱性（红色）状态。这种变化是CO 2和H 2 O形成的结果，以及培养基中的辣椒氧化至碱性胺。除了葡萄糖，乳糖和/或蔗糖之外，在倾斜上形成的大量发酵产物中和碱性胺并使倾斜酸性（黄色）呈现，条件是在18至24小时内读取反应。如果倾斜和臀部成为碱性，葡萄糖尚未发酵。显示该反应的生物被定义为非发酵罐，并从中存在于培养基中的胨。通过琼脂中的气泡或裂纹或通过从管的侧面或底部分离来表示CO 2和氢气（H2）的形成。H 2 S的生产（减少到H2S的硫代硫酸钠）需要酸性环境，并且与柠檬酸铁铵的反应产生管中的琼脂屁股的变黑。
TSIA测试中使用的媒体
三重糖铁琼脂
| 酪蛋白的胰腺摘要 | 15.0gm. |
| 乳糖 | 10.0gm. |
| 蔗糖 | 10.0gm. |
| 氯化钠 | 5.0gm. |
| 动物组织的消化物消化 | 5.0gm. |
| 酵母抽提物 | 3.0gm. |
| 牛肉提取物 | 3.0gm. |
| 葡萄糖 | 1.0GM |
| 柠檬酸铁铵 | 0.5gm. |
| 硫代硫酸钠 | 0.3gm. |
| 苯酚红色 | 0.024gm. |
| 琼那 | 12.0gm. |
最终pH 7.3 +/- 0.2，25ºC。
TSIA测试程序
- 用直接接种针头，触及孤立的殖民地的顶部。
- 通过首先通过培养基的中心到管的底部来接种TSI琼脂，然后将琼脂倾斜的表面刺伤。
- 将盖子松散地离开，并在35°-37℃下在环境空气中孵育18至24小时。
- 在孵育后，检查介质中的倾斜和对接，黑化和裂缝中的颜色变化。
结果解释TSIA测试
| S.N. | 结果（倾斜/屁股） | 象征 | 解释 |
| 1 | 红色/黄色 | K A | 仅葡萄糖发酵，蛋白胨分解代谢。 |
| 2 | 黄色/黄色 | A / A. | 葡萄糖和乳糖和/或蔗糖发酵。 |
| 3. | 红色/红色 | K / K. | 在有氧和/或厌氧条件下，无发酵，蛋白胨分解代谢。 |
| 4. | 黄色/黄色与泡沫 | A / A，G | 葡萄糖和乳糖和/或蔗糖发酵，产生的天然气。 |
| 5. | 红色/黄色与泡沫 | k / a，g | 仅生产葡萄糖发酵。 |
| 6. | 红色/黄色，泡沫和黑色沉淀物 | k / a，g，h2S. | 仅葡萄糖发酵，生产的天然气，h2s生产。 |
| 7. | 黄色/黄色，带泡沫和黑色沉淀物 | A / A，G，H2S. | 葡萄糖和乳糖和/或蔗糖发酵，生产的天然气，H2s生产。 |
| 8. | 红色/黄色，黑色沉淀物 | k / a，h2S. | 只有葡萄糖发酵，h2s生产。 |
| 9. | 黄色/黄色，黑色沉淀物 | 一个/ a，h2S. | 葡萄糖和乳糖和/或蔗糖发酵，H2s生产。 |
TSIA测试的局限性
- 刺伤介质的屁股很重要。未能刺伤映射无效此测试。刺伤时必须保持琼脂的完整性。
- 在此测试中必须松动，或者将发生错误的结果。
- TSI中的反应不应超过24小时孵育，因为来自乳糖和/或蔗糖的发酵产物的有氧氧化，并且倾斜最终恢复到碱性状态。
- 产生硫化氢的生物可以在介质的对接中掩盖酸产生。然而，硫化氢产生需要酸性环境，因此对接部分应该被认为是酸。
- 与其他含铁介质相比，TSI在检测硫化氢时不如硫化氢吲哚运动（SIM）培养基相比那么敏感。因此，具有弱硫化氢产生的生物可以仅显示含硫化氢活性，或根本没有。
- 某些物种或菌株可以给予延迟反应或完全不能以规定的方式发酵碳水化合物。但是，如果生物体在48小时内未能发酵葡萄糖，则最有可能在肠杆菌痤疮家庭中。
- 在接种三重糖铁琼脂时，纯文化至关重要。如果接种混合培养，可能发生不规则的观察。
- 必须进行进一步的生化试验和血清学敏感，以便确定生物体的确定和确认。
TSIA测试的质量控制
| 测试生物 | 倾斜 | 屁股 | 天然气生产 | H2S生产 |
| 大肠杆菌ATCC25922 | 黄色 | 黄色 | + | - |
| 假单胞菌铜绿假单胞菌ATCC27853 | 红色的 | 红色的 | - | - |
| 沙门氏菌肠道ATCC14028. | 红色的 | 黄色 | + | + |
| Shigella Sonnei.ATCC9290. | 红色的 | 黄色 | - | - |
参考
- Tille P.M（2014）Bailey And Scott的微生物学，ThirteN版本，Mosby，Inc。
- Aneja K.R（2003），微生物学，植物病理和生物技术，第四版，新时代国际（P）Limited，Ansari Road，新德里-110002的微生物学。
- https://assets.thermofisher.com/tfs-assets/mbd/instructions/ifu454982.pdf.
- http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=76&sim=216&cnt=1
- http://www.austincc.edu/microbugz/triple_sugar_iron_agar.php.
- http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/difco_bbl/226540.pdf.
这是伟大的和教育