类型的显微镜

一台好的显微镜应该具备三种特性:

1. 好分辨率:分辨力指的是对距离较近的物体产生独立图像的能力，这样它们就可以被区分为两个独立的实体。的分辨率:
   • 肉眼直径约为0.2 mm (200 μm)
   • 光学显微镜约为0.2 μm
   • 电子显微镜大约是0.5 nm
     分辨率取决于折射率。油的折射率比空气高。
2. 很好的对比:这可以通过对标本进行染色进一步改善。
3. 好放大:这是通过使用凹透镜实现的。

亮场或光学显微镜

亮场显微镜或光学显微镜在较亮的背景下形成较暗的图像。

暗视野显微镜

原则:在暗视野显微镜下，物体在黑暗背景下显得明亮。这是由于使用了一种特殊的暗场聚光镜而实现的。

应用程序:它被用来识别活的、未染色的细胞和像螺旋菌这样的薄细菌，这些细菌不能通过光学显微镜看到。

相衬显微镜

它通过在细胞和水之间创造不同的对比来形象化活细胞。它将折射率和细胞密度的微小差异转化为易于检测的光强度变化。

它对研究很有用:

• 微生物活性
• 决定活细胞的形状
• 检测细菌成分，如内生孢子和包涵体。

荧光显微镜

原则:当荧光染料暴露在紫外线(UV)射线下时，它们会变得兴奋，并发出荧光，也就是说，它们将这种不可见的短波长射线转换成较长波长的光(可见光)。

应用程序:表面荧光显微镜有以下用途:

• 当置于紫外线灯下时，例如:环孢子虫
• 用荧光染料覆盖的微生物，例如用于疟疾寄生虫(QBC)的吖啶橙和用于疟疾寄生虫的金胺酚结核分枝杆菌．
• 免疫荧光:用荧光染料标记的抗体检测细胞表面抗原或与细胞表面抗原结合的抗体。有三种类型:直接IF、间接IF和流式细胞术。

电子显微镜

它是恩斯特·鲁斯卡在1931年发明的。它与光学显微镜有很多不同之处。

市场有两种类型:

• 传播他们(MC型，内部结构检查，分辨率0.5 nm，二维视图)
• 扫描电镜(检查表面，分辨率7纳米，提供三维视图)

透射电子显微镜原理

样品制备:细胞按以下步骤制备非常薄的标本(20至100纳米厚)

• 固定:用戊二醛或四氧化锇作稳定剂固定细胞。
• 脱水:然后用有机溶剂(如丙酮或乙醇)将标本脱水。
• 包埋:试件嵌入塑料聚合物中，然后硬化形成坚实的块体。大多数塑料聚合物不溶于水;因此，标本在包埋前必须完全脱水。
• 切片:然后用超微切片刀将标本切成薄片，切片安装在金属载片(铜)上。

冷冻蚀刻技术:这是一种观察细胞内细胞器的标本制备方法。

细胞被迅速冷冻，然后被加热→被刀折断，内部细胞器暴露出来→受到升华→被铂和碳涂层遮蔽。

提高EM对比度的措施包括:

• 用柠檬酸铅和醋酸铀酰等重金属盐溶液染色
• 磷钨酸或醋酸铀酰等重金属的负染色。
• 阴影:标本表面以45度角覆盖一层铂或其他重金属薄膜，使金属只撞击微生物的一面。

参考文献

Apurba Sankar sstry和Sandhya Bhat K. 2018。微生物学和免疫学评论。第6版。杰比兄弟医学出版社(P)有限公司(点击此处从AMAZON购买此书)